CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES In-Vitro COLEGIO CAFAM COORDINACIÓN DE CIENCIAS NATURALES CURSO DE CAPACITACIÓN EN BIOTECNOLOGÍA CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES In-Vitro

INTEGRANTES DEL MEDIO DE CULTIVO MACRONUTRIENTES ELEMENTO FORMA DE ENCONTRARSE FUNCIÓN EN EL EXPLANTE NITROGENO NO3- (NITRATO) NH4+ (AMONIO) Formación de aminoácidos, proteínas, bases nitrogenadas. FÓSFORO HPO42- (IONES FOSFATO) H2PO4- Captura de electrones en el proceso de fotosíntesis, transferencia de energía en el metabolismo de carbohidratos, síntesis de ácidos nucleicos. AZUFRE SO42- (SULFATO) Síntesis de lípidos, formación de proteínas (enlaces cisteínicos) CALCIO Ca2+ (ION CALCIO) Ayuda al crecimiento y división celular, incrementa la resistencia de los tejidos. MAGNESIO Mg2+ (ION MAGNESIO) Componente estructural de la clorofila, cofactor en la acción enzimática, POTASIO K+ (ION POTASIO) Contrarrestar iones negativos, regular el pH, formación de enzimas.

INTEGRANTES DEL MEDIO DE CULTIVO MICRONUTRIENTES ELEMENTO FORMA DE ENCONTRARSE FUNCIÓN EN EL EXPLANTE HIERRO Fe2+ (HIERRO II) Formación estructural de la clorofila, estructura y funcionamiento de algunas proteínas que actúan en la fotosíntesis. MANGANESO Mn2+ (MANGANESO II) Mantienen la estructura de los cloroplastos ZINC Zn2+ (ZINC II) Mantienen los niveles de clorofila y permiten un buen desarrollo de los cloroplastos MOLIBDENO MoO42- (MOLIBDATO) COBALTO Co2+ (COBLATO II) Formación de vitaminas, síntesis de ácidos nucleicos. BORO BO3- (BORATO) Mantiene una adecuada proporción en el tamaño de la pared celular, colabora en la actividad meristemática, síntesis de citoquininas YODO I- (YODURO) Previene la oxidación de los tejidos COBRE Cu2+(COBRE II) Cofactores en la acción enzimática.

SOLUCIONES STOCK Y SUBSTOCK Las soluciones principales, o aquellas que sirven como punto de partida, se llaman soluciones stock, madre o patrón. Las soluciones que se derivan de las soluciones stock ó que se preparan a una concentración diferente para luego formar la solución stock se conocen como substock.

CALCULOS PARA PREPARAR UNA SOLUCIÓN STOCK Y SUBSTOCK Preparación de solución Substock de Molibdato de Sodio: Pesamos 0,1g y lo disolvemos en un balón de 25ml Concentración = 0,1g/0,025L = 4g/L A partir de esta solución obtendremos la concentración de Molibdato que necesitamos en la solución E C1V1 = C2V2 Fórmula general en soluciones Como queremos saber cuánto de nuestra solución substock debemos tomar para obtener la concentración en la solución madre debemos hallar el volumen 1 V1 = C2V2 = 0.05g/L x 1000mL = 12,5mL C1 4g/L

PREPARACIÓN DE HORMONAS Las hormonas se preparan de la siguiente forma: Se pesa 0,1g ó 100mg de la hormona Se disuelve en 5ml de NaOH 0,5N Luego se lleva a 100mL de volumen. Las hormonas quedan con una concentración igual a 1000g/L