Concordancia en el estado mutacional de RAS entre biopsias líquidas y sólidas en pacientes con cáncer colorrectal metastásico (CCRm) con RAS no mutado en tratamiento de primera línea en España. Estudio PERSEIDA (NCT02792478) Manuel Valladares-Ayerbes1, Pilar García-Alfonso2, Jorge Muñoz Luengo3, Paola Pimentel Cáceres4, José María Viéitez5, Juan J. Cruz-Hernández6, Marta Llanos7, Carlos Garcia Girón8, LLuís Cirera9, Ariadna Lloansí Vila10 1. Departamento de Oncología Médica, Hospital Universitario Reina Sofía. CIBERONC Instituto de Salud Carlos III, Córdoba; 2. Hospital General Universitario Gregorio Marañón. Madrid; 3. Hospital San Pedro de Alcántara. Cáceres; 4. Hospital General Universitario Santa Lucia. Cartagena; 5. MD Anderson Cancer Center. Madrid; 6. Hospital Universitario de Salamanca. Salamanca; 7. Hospital Universitario de Canarias. Santa Cruz de Tenerife; 8. Hospital Universitario de Burgos. Burgos; 9. Hospital Universitario Mutua Terrassa. Terrassa; 10. Amgen S.A. Barcelona

INTRODUCCIÓN Y OBJETIVOS Las biopsias tumorales se usan ampliamente en la práctica clínica para evaluar el estado mutacional de RAS en pacientes con CCRm. Las nuevas técnicas de genotipado basadas en el ADN tumoral circulante (tc) presentan mayor sensibilidad y comodidad para el paciente. Estudios previos han demostrado un alto grado de concordancia entre las mutaciones somáticas detectadas en el tejido tumoral y las determinadas en ADNtc de pacientes con tumores avanzados1,2. Hemos estudiado la concordancia entre las evaluaciones del estado mutacional RAS basadas en biopsias de tejido y de sangre en pacientes con CCRm sin tratamiento previo, así como las mutaciones de RAS adicionales detectadas por la biopsia líquida. La novedad en este estudio radica en que se trata de un estudio prospectivo, se centra en pacientes con CCRm en primera línea y que dichos pacientes presenta RAS no mutado según la biopsia sólida. 1. Bettegowda C et all. Sci Transl Med 2014; 6(224): 224ra24. 2. Diehl F et all. Nat Med 2008; 14(9): 985–990.

MATERIAL Y MÉTODOS PERSEIDA es un estudio prospectivo, observacional, multicéntrico en curso, que incluyó 119 pacientes con CCRm primera línea y RAS no mutado según la biopsia sólida realizada por práctica clínica en 20 centros españoles. Se recogieron muestras de sangre antes del inicio del tratamiento de primera línea y se enviaron a Sysmex Inostics GmbH (Hamburgo) para el análisis de RAS con BEAMing. Se realizarán biopsias líquidas adicionales a las 20 ± 2 semanas y a la progresión de la primera línea. La máxima sensibilidad de detección de mutaciones en RAS corresponde a una fracción alélica mutada (MAF) de 0,02%. Muestras de sangre de CCRm RAS no mutado (por tejido) N=119 Antes del inicio del tratamiento de primera línea   20 ± 2 semanas Progresión enfermedad Biopsia líquida

MATERIAL Y MÉTODOS Principales criterios de selección Sujetos que otorguen su consentimiento informado por escrito. Sujetos con CCRm, medible por RECIST, que inicien tratamiento en primera línea. Sujetos con diagnóstico histológico confirmado de CCRm y RAS no mutado. Criterios de exclusión Mujeres embarazadas o en periodo de lactancia. Sujetos que hayan recibido previamente anticuerpos monoclonales contra EGFR (cetuximab o panitumumab), moléculas pequeñas inhibidoras de EGFR (como erlotinib) u otros tratamientos biológicos contra el cáncer. Antecedentes de otro tumor sólido o hematológico en los 5 años previos, excepto antecedentes de carcinoma de células basales de la piel o cáncer de cérvix preinvasivo Sujetos que estén participado o hayan participado en un ensayo clínico en los 30 días anteriores a la inclusión.

RESULTADOS: características demográficas y clínicas Población evaluable N = 119 (%) Hombres, n (%) 73 (61,3) Mediana de edad, años (min, máx) 65 (26, 81) ECOG performance status, n (%) 1 2 ND 56 (47,1) 59 (49,6) 1 (0,8) 3 (2,5) Tratamiento previo, n (%) Radioterapia Quimioterapia Radioterapia y quimioterapia Sin tratamiento previo 12 (10,1) 7 (5,9) 89 (74,8) Localización tumor primario, n(%) Colon izquierdo Colon derecho 95 (79,8) 24 (20,2) Cirugía previa, n(%) Sí No 45 (37,8) 68 (57,1) 6 (5,0) ND: no disponible

Fracción alélica mutada (límite) RESULTADOS: biopsias líquidas en la visita basal en pacientes con RAS no mutado según biopsia sólida La tasa de detección global de RAS mutado según BEAMing en la visita basal fue del 12,6% (MAF ≥ 0,02%). El porcentaje de concordancia negativa entre las biopsias sólidas y líquidas fue del 87,4% (IC del 95%: 80,1% -92,8%)1. 1Porcentage de pacientes con resultado concordante entre biopsia sólida y líquida (no mutados con ambas técnicas) 2Un paciente tuvo mutaciones en ambos genes, KRAS y NRAS IC, intervalo de confianza   Exón Fracción alélica mutada (límite) ≥1% ≥0,1% ≥0,02% KRAS mutado, n (%) 2 3 (2,5) 5 (4,2) 11 (9,2) 3 0 (0) 4 1 (0,8) Total 12 (10,1) NRAS mutado, n (%) 2 (1,7) 4 (3,4) Tasa de detección de RAS mutado, % (IC 95%) 2,5 (0,5 – 7,2) 5,02 (1,9 – 10,7) 12,61 (7,2 – 19,9) Porcentaje de concordancia negativa1, % (IC 95%) 97,5 (92,8 – 99,5) 95,0 (89,4 – 98,1) 87,4 (80,1 – 92,8)

RESULTADOS: Pacientes discordantes (RAS WT tejido, RAS mutado plasma) (I) Paciente RAS mt Exón Codón MAF Localización de la extracción de la biopsia sólida Localización tumor Localización metástasis Días entre colección de tejido y plasma Tratamiento de primera línea Mejor respuesta global (no confirmado) 1 KRAS exón 2 13 0,032% Tumor primario Colon izquierdo Hígado, pulmón 59 FOLFOX + PANITUMUMAB RP 2 0,046% 19 3 12 2,952% Hígado 43 EE 4 NRAS exón 3 61 0,073% Metástasis (Hígado) 38 5 NRAS exón 2 0,020% Ganglios, otras 114 CAPECITABINE 6 KRAS exón 4 146 0,085% pulmón, ganglios 528 7 0,024% Pulmón, ganglios, otras 553 PE mt= mutado, MAF= fracción alélica mutada, RC= respuesta completa, RP= respuesta parcial, EE= enfermedad estable,  NE= no evaluable y PE= progresión enfermedad

RESULTADOS: Pacientes discordantes (RAS WT tejido, RAS mutado plasma) (II) Paciente RAS mt Exón Codón MAF Localización de la extracción de la biopsia sólida Localización tumor Localización metástasis Días entre colección de tejido y plasma Tratamiento de primera línea Mejor respuesta global (no confirmado) 8 KRAS exón 2 13 0,021% Metástasis (Hígado) Colon izquierdo Hígado, pulmón 42 FOLFOX + PANITUMUMAB EE 9 12 0,057% Tumor primario Ganglios, peritoneo 105 FOLFIRI + PANITUMUMAB 10* KRAS exón 2 NRAS exón 2 0,723% 0,691% Hígado RC 11 0,222% Primaria 7 6,060% Hígado, pulmón 61 0,085% 14 FOLFOXIRI +PANITUMUMAB NRAS exón 3 0,163% Pulmón, ganglios 55 NE 15 5,951% Otras 83 *2 mutaciones en exón 2 KRAS, codón 12 (aminoácido g34a (0,068%) y g34c (0,723%)); 1 mutación en exón 2 NRAS, codón 12 (0,691%) mt= mutado, MAF= fracción alélica mutada, RC= respuesta completa, RP= respuesta parcial, EE= enfermedad estable, NE= no evaluable y PE= progresión enfermedad

CONCLUSIÓN A pesar de una elevada concordancia entre las biopsias, se observaron mutaciones adicionales de RAS en el ADNtc, aunque mayoritariamente en el límite inferior de la MAF. Aún no se ha definido el MAF de RAS en biopsia líquida clínicamente relevante. La mayoría de los pacientes con RAS mutado en el análisis de la biopsia líquida (según BEAMing) y con MAF baja, presentan respuesta (parcial o completa) con panitumumab. En futuros análisis de este estudio se evaluarán la supervivencia libre de progresión y la tasa de respuesta global en función del estado mutacional de RAS según biopsia líquida. El seguimiento longitudinal de las mutaciones RAS en ADNtc podría ayudarnos a comprender mejor sus implicaciones clínicas y biológicas.

Disclosure Information Consultant or Advisory Role: Amgen, Roche, Merck, Sanofi, Servier Estudio financiado por Amgen Asistencia en la redacción médica financiada por Amgen proporcionada por Irene Mansilla (TFS, S.L.)