Geles Agarosa Acidos nucleicos Acrilamida Acidos nucleicos Proteinas.

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Transcripción de la presentación:

Geles Agarosa Acidos nucleicos Acrilamida Acidos nucleicos Proteinas

Electroforesis en gel de acrilamida 1. Preparación . Soporte vertical Start at o minutes, run to 2:44

Electroforesis en gel de acrilamida 1. Preparación . Acrilamida – Bis acrilamida 10%........... 16.67 ml (stock 30%) TBE 1 X………………………………………………. 10 ml (stock 5 X) H20 …………………………………………………… 23.112 ml Persulfato de amonio (APS) ……………….. 100 µl TEMED ………………………………………………. 50 µl Start at o minutes, run to 2:44 Polimerización en alrededor de 20 minutos (depende de la temperatura)

Electroforesis en gel de acrilamida . 2. Preparación de la muestra. 15 ml de DNA (digestión) 4 ml de Loading Buffer Buffer Color Azul de bromofenol, xilencianol, naranja de acrifdina Densidad Glicerol o sacarosa Start at o minutes, run to 2:44

Electroforesis en gel de acrilamida 3. Sembrado de la muestra en el gel. Ejemplo: peine de 22 calles Start at o minutes, run to 2:44

Electroforesis en gel de acrilamida 3. Sembrado de la muestra en el gel. Start at o minutes, run to 2:44

Electroforesis en gel de acrilamida 3. Sembrado de la muestra en el gel. Siembra: 19 ul (15 ul muestra + 4 ul loading buffer) Orden de siembra: L Start at o minutes, run to 2:44 L100 = Ladder de 100 pb

Electroforesis en gel de acrilamida 3. Sembrado de la muestra en el gel. L Start at o minutes, run to 2:44

Electroforesis en gel de acrilamida 4. Corrida del gel. Aproximadamente 250 - 290 V Start at o minutes, run to 2:44

Electroforesis en gel de acrilamida 5. Visualización del gel. Tinción con DSView Nuclei Acid Stain (Green fluorescence) Tinción posterior a la corrida (20 minutos en oscuridad) Revelado con luz UV o azul Start at o minutes, run to 2:44