El kits de prueba Veriflow esta certificados por la AOAC Internacional, la organización mundial de pruebas de normalización para la industria alimentaria.

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1 El kits de prueba Veriflow esta certificados por la AOAC Internacional, la organización mundial de pruebas de normalización para la industria alimentaria.

2  Tecnología empleada para detección directa y cualitativa de E. coli O157:H7 en diferentes muestras de alimentos.  Herramienta que permite garantizar de forma fácil y confiable el suministro de alimentos seguros, tanto para fabricantes como para el gobierno regulador.

3  Es una cepa enterohemorrágica de la bacteria E. coli y una causa de intoxicación alimentaria debido a la producción de verotoxina.  La infección conduce frecuentemente a una diarrea hemorrágica y ocasionalmente a una falla renal (Síndrome urémico hemolítico).  Afecta principalmente a niños y ancianos.  La transmisión se da a través de la vía fecal oral.

4  La reacción en cadena de la polimerasa, es una técnica de biología molecular empleada para obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN particular, partiendo de un mínimo; en teoría basta partir de una única copia de ese fragmento original, o molde.  Esta técnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es que tras la amplificación resulta mucho más fácil identificar con una muy alta probabilidad, virus o bacterias causantes de una enfermedad, identificar personas (cadáveres) o hacer investigación científica sobre el ADN amplificado.

5 1) Extracción del ADN deseado 2) Preparación de la mezcla de reacción (Master mix) 3) Separación de master mix en alícuotas y agregado del ADN de interés 4) Amplificación en Termociclador 5) Electroforesis en gel de agarosa 6) Observación en transiluminador UV

6  H2O ultrapura  Buffer  Mg+2  dNTPs  Primer forward  Primer reverse  ADN polimerasa ADN de interés Termociclador

7  Los fragmentos de PCR se revelan mediante electroforesis en gel de agarosa. Gel de agarosa y buffer de corrida TAE o TBE Siembra 5 µl de muestra + 2 µl de azul de bromofenol

8  Un inmunoensayo es un método analítico que usa anticuerpos para detectar y medir analítos espesificos.  VENTAJAS: Anticuerpos específicos permiten la detección del microorganismo target No es necesario purificar la muestra antes de analizarla Requiere pasos mínimos y sencillos de preparación de muestra comparado con otros métodos específicos (proteínas).

9  Simple  Rápido  Sensible  Económico  Confiable  Apto para trabajo de campo

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13  Veriflow para E. coli O157: H7 representa una clase de diagnostico ultra-sensible y fácil de usar: Tecnología de captura de firma de ADN para la detección cualitativa de la especie E. coliO157: H7.  Esta técnica tiene la capacidad de conservar multiplers genes de E. coli O157:H7 ofreciendo una precisión superior en comparación con metodologías actuales.  La tecnología de flujo vertical patentado permite la sensibilidad de las pruebas de PCR en tiempo real, pero con la facilidad de uso asociado con los ensayos de flujo lateral. El resultado es un sistema eficaz y rápida que minimiza la preparación de muestras, agiliza el tiempo de resultados, mejora la precisión de la prueba, y proporciona fácil interpretación los datos para el usuario final.

14  Mastermix  Reactivos  Veriflow O157: H7 Casetes  1,5 ml de muestra mBPW o mTSB  El termociclador  Se modifica agua de peptona tamponada (IS mBPW) Grande  Se modifica caldo de soja tríptico (IS mTSB) Grane  Bandeja de carga de PCR

15  Enriquecimiento: Después de 18 horas de enriquecimiento, transferir la muestra de 500 μ l a un tubo de 1,5 ml. Calentar la muestra durante 10 minutos, luego dejar enfriar a temperatura ambiente.  Amplificación: Transferir 5 µl de muestra en el tubo de reactivo proporcionado. Colocar el tubo dentro del termociclador y ejecutar del programa.  Detección: Retirar el tubo de reactivo del termociclador. Colocar el contenido del tubo de reactivo en la ventanilla de casete de prueba. Esperar 3 minutos y observar los resultados.

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17 Determinación cualitativa de E. coli O157:H7

18 RAPIDO Y FACIL:  Reduce la detección tradicional de 120 horas a solo 18 horas.  NO requiere de purificación de ADN.  Enriquecimiento de 1-paso para todas las matrices de alimentos. ALTA SENSIBILIDAD  La amplificación de múltiples marcadores de genes conservados de E. coli O157: H7 proporciona una sensibilidad superior. INCLUSIVIDAD SUPERIOR Y EXCLUSIVIDAD  Tasa de inclusividad 100%  Tasa de exclusividad del 100% ECONÓMICO  Termociclador compacta reduce la huella de equipos  Eliminación de los sistemas complejos reduce los costes de equipamiento en un 80% sin sacrificar la eficiencia operativa y la precisión.  Facilidad de uso con personal menos capacitados para la ejecución del sistema.

19 Comparada con la tecnología de flujo lateral: Comparada con la tecnología RT-PCR:  Produce resultados 3 min después de la adición de la muestra.  Proporciona una mayor sensibilidad de detección.  Detecta firmas moleculares permitiendo una mayor especificidad.  No hay resultados ambiguos.  No requiere de purificación de ADN o engorrosos pasos de muestreo.  Formación mínima.  Fácil despliegue.

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