Actividad enzimática
Enzimas • Las enzimas son catalizadores biológicos que disminuyen la energía de activación de las reacciones que catalizan, pero no modifican la constante de equilibrio. Por tanto aceleran en igual proporción la velocidad de la reacción en las dos direcciones.
Unión específica •La(s) molécula(s) que va(n) a reaccionar, sustrato(s), se unen a una región en la superficie de la enzima llamada sitio activo.
Holoenzima Apoenzima ENZIMAS La actividad catalítica de una enzima depende de su integridad como ESTRUCTURA NATIVA. Algunas enzimas requieren de otras moléculas para catalizar una reacción. ENZIMAS SIN GRUPOS QUÍMICOS ADICIONALES GRUPO PROSTÉTICO Apoenzima COFACTORES IONES METÁLICOS (Fe2+, Mg2+, Mn2+, Zn2+) GRUPOS COMPLEJOS COENZIMAS Holoenzima
UNIDADES DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA Actividad Unidad Internacional (U)=μmol producto formado/min Katal = mol producto formado/s Actividad específica U/mg proteína Katal/mg proteína
Velocidad inicial • La velocidad de una reacción que no sea de orden cero disminuye a medida que ésta progresa porque va disminuyendo la concentración del o los reactantes, y porque si la reacción es reversible se da la reacción inversa. • Por ello es conveniente medir la velocidad inicial (vo)de la reacción, que es la velocidad antes de que la concentración de los reactantes disminuya significativamente y de que los productos alcancen una concentración que produzca una significativa reacción inversa. • En el caso de las reacciones catalizadas por enzimas, otras dos razones que hacen muy conveniente medir velocidades iniciales son: – 1) el producto es un inhibidor de la reacción, aun cuando la reacción no sea reversible. – 2) la enzima puede ser inestable en el medio de reacción. -0p0poooooo888’9
TABLA DE PURIFICACIÓN Procedimiento Volumen de la fracción (mL) Proteína total en la fracción (mg) Actividad enzimatica (µmol/min mL) Actividad total Unidades totales (µmol/min ) Actividad especifica (µmol/min mg ) Actividad específica total (µmol/min mg totales ) Veces de purificación Rendimiento