Rosa Cecilia Aldana 1, Alex Enrique Bustillo Pardey2 Biología de Leucothyreus femoratus en cultivos de palma de aceite y evaluación de nematodos para su control Rosa Cecilia Aldana 1, Alex Enrique Bustillo Pardey2 12Bióloga. Asistente de Investigación Área de Entomología, Programa de Plagas y Enfermedades, Cenipalma. raldana@cenipalma.org; 2Ph. D. Coordinador Programa de Plagas y Enfermedades, Cenipalma. abustillo@cenipalma.org INTRODUCCIÓN En cultivos jóvenes de palma de aceite, el defoliador Leucothyreus femoratus Burmeister (Coleoptera: Melolonthidae), se ha convertido en un problema generalizado en las diferentes zonas palmicultoras, debido a la presencia de gramíneas en los lotes establecidos del cultivo, lo que favorece su reproducción dado que las larvas son rizófagas, mientras que los adultos son defoliadores de la palma (Fig. 1). Por lo tanto, estudios sobre su biología y comportamiento han sido esenciales para la selección de controladores biológicos de sus poblaciones. RESULTADOS CRÍA DE L. femoratus Se estableció la cría de L. femoratus bajo condiciones de laboratorio, partiendo de individuos obtenidos en campo. Por cinco generaciones lo que permitió realizar evaluaciones de nematodos entomopatógenos. El defoliador L. femoratus cumple su ciclo de vida de huevo a adulto en 175 ± 14,4 días; el periodo de incubación del huevo fue de 8,6 ± 0,6 días; pasa por tres instares con una duración de 108,2 ± 1,4 días, el estado de pupa duró 8,5 ± 0,5 días y la longevidad promedio de los adultos fue de 46 ± 3 días (Tabla 1). Las hembras de L. femoratus ovipositan en promedio 52 huevos. La tabla de vida muestra que la mayor tasa de mortalidad (qx) se presenta en III instar (qx= 0,37) y II instar (qx= 0,27), mientras que la menor tasas de mortalidad fue en estado de huevo (qx= 0,03). La tasa reproductiva neta fue de 9,9. mostrando buena capacidad reproductiva (Tabla 2). Tabla 1. Ciclo de vida de Leucothyreus femoratus IC= Intervalo de confianza. Tabla 2. Parámetros reproductivos de Leucothyreus femoratus. Estado de desarrollo No. Duración (días) ± IC Huevo 280 8,6 ± 0,06 I instar 272 13,0 ± 0,07 II instar 231 25,8 ± 0,17 III instar 173 69,6 ± 0,19 Larva 107,4 ± 0,21 Pupa 110 8,5 ± 0,10 Adulto 92 46,0 ± 0,69 TOTAL 171,4 ± 0,83 Estado de desarrollo nx dx qx lx mx Ro Huevo 268 8 0,03 1,00 I instar 260 39 0,15 0,97 II instar 221 55 0,25 0,82 0,21 III instar 166 61 0,37 0,62 0,23 Pupa 105 17 0,16 0,39 0,06 Adulto 88 0,33 - 30 9,9 A C B Figura 1. Defoliación ocasionada por Leucothyreus femoratus. A. cultivos jóvenes B. detalle de la defoliación C. Adulto defoliando. Los adultos también se alimentan de plantas de hoja ancha como kudzu, mucuna y Cassia reticulata (Fig. 2), pero no se reproducen en estas plantas. nx: número de individuos que sobrevive al inicio del intervalo de edad x; dx: número de individuos que mueren entre las edades x y x+1; qx: probabilidad de morir entre x y x+1; lx: proporción de supervivencia a la edad x; mx: número promedio de progenie hembras producida por cada hembra de edad x. Ro: tasa reproductiva neta. C Figura 2. Adultos de Leucothyreus femoratus alimentándose en plantas de hoja ancha. A) Cassia reticulata. B, C) Kudzu, D. Mucuna. Se registran larvas de L. femoratus en altas poblaciones en raíces de la planta invasora Asystasia intrusa. Las larvas también se alimentan de materia orgánica, como residuos de estípites en estado de descomposición (Fig. 3). EVALUACIÓN DE NEMATODOS ENTOMOPATÓGENOS PARA EL CONTROL DE L. femoratus Bioensayo de patogenicidad. No hubo diferencias estadísticas en la mortalidad corregida (Schneider-Orelli 1947) de larvas de L. femoratus de III instar, ocasionada por las tres especies de nematodos al cabo de 72 horas de evaluación. Sin embargo, el nematodos Steinernema sp.1 ocasionó el 81% de mortalidad en las primeras 36 horas, seguida de las dos especies de Heterorhabditis (Tumaco y Villa 14) que ocasionaron el 75y 77 % de mortalidad de las larvas, respectivamente. Figura 3. Sitios de reproducción de Leucothyreus femoratus A) Asystasia intrusa, B, C) larva y adultos en residuos de estípites en descomposición. Para la evaluación de controladores biológicos de L. femoratus se desarrolló una metodología para su cría en laboratorio, se determinó la biología y parámetros poblacionales y se evaluó la virulencia de especies de entomo nematodos nativos. MATERIALES Y MÉTODOS Figura 6. Larva de Leucothyreus femoratus afectada por nematodos. La investigación se llevó a cabo en el laboratorio de Cenipalma localizado en predios de la plantación Unipalma de los Llanos, municipio de Cumaral (Meta), que tiene una ttemperatura promedio de 28 ± 1 °C y 75 ± 4 % de humedad relativa. Evaluación de virulencia CRÍA DE L. femoratus En el experimento realizado bajo condiciones de umbráculo, los nematodos del género Heterorhabditis ocasionaron mayor mortalidad al III instar de L. femoratus. La mortalidad corregida de la especie H. Tumaco fue del 86%, seguida de la especie Villa 14 que fue del 71%, mientras Steinernema sp. 1, ocasionó 52.6% de mortalidad en las larvas (Tabla 3). Las larvas afectadas por los nematodos del género Heterorhabditis presentaban coloración rosada, y se podían observar los nematodos en el interior del cuerpo (Fig. 6). En condiciones controladas de campo, la dosis más alta de 1000 JI/cm2 de Heterorhabditis Villa 14, ocasionó la mayor mortalidad corregida con el 74,4%, seguida por la dosis de 500 JI/cm, y en H. Tumaco fue del 52,6%. Se hizo recolección de diferentes estados de desarrollo de L. femoratus, las larvas se alimentaron con zanahoria y posteriormente se transfirieron a recipientes plásticas con suelo previamente esterilizado al cual se le sembró arroz y cuyas raíces eran la fuente de alimento para las larvas; los adultos se colocaron en frascos plásticos y se alimentaron con foliolos de palma (Fig. 4). Figura 4. Cría de Leucothyreus femoratus. A) alimentación de larvas con zanahoria. B) cámara de cría con arroz. C) manejo de adultos en frascos D) alimentación de adultos con foliolos. Ciclo de vida y parámetros reproductivos. Se dispusieron parejas de adultos en cámaras de cría de 6 onzas, que contenían suelo estéril (70% arcillo arenoso y 30% materia orgánica). Se revisaron y separaron los huevos diariamente, éstos se dispusieron individualmente en cámaras de cría y permanecieron hasta la etapa adulta. Se hizo seguimiento al número de posturas por hembra, periodos de incubación de los huevos y duración de los diferentes instares y estados de desarrollo. Adicionalmente, se hizo seguimiento a 268 huevos obtenidos en laboratorio, y se estimaron parámetros poblacionales. Tabla 3. Mortalidad corregida de larvas de III instar de L. femoratus ocasionada por nematodos entomopatógenos en condiciones de umbráculo. Tabla 4. Mortalidad corregida de larvas de III instar de L. femoratus ocasionada por nematodos entomopatógenos en condiciones controladas de campo. Tratamientos JI/cm2 Mortalidad corregida (%) Heterorhabditis Tumaco 500 84.0 Heterorhabditis Villa 14 71,4 Steinernema sp. 1 52,6 Testigo Absoluto   Tratamientos JI/cm2 Mortalidad corregida (%) Heterorhabditis Villa14 1000 74,4 500 59,4 Heterorhabditis Tumaco 40,6 Testigo Absoluto   EVALUACIÓN DE NEMATODOS PARA EL CONTROL DE L. femoratus Bioensayo de patogenicidad. Se evaluaron tres especies de nematodos, Steinernema sp. 1, y Heterorhabditis (Tumaco) y Heterorhabditis (Villa 14) sobre III instar. Se utilizó un diseño de bloques completamente aleatorizados, con 5 repeticiones. La unidad experimental, estuvo conformada por 20 individuos. Las cámaras de infección consistieron en recipientes plásticos de 30cm3 de capacidad, con papel filtro. Se aplicó 250 µl de una suspensión de 5000 nematodos JI/cámara, y a los controles se les agregó agua destilada estéril. Se realizaron lecturas 12, 24, 48, 60 y 72 horas después de la inoculación. La variable de respuesta fue el número de larvas muertas por los nematodos. Evaluación de virulencia. Se realizaron dos experimentos de virulencia bajo umbráculo y condiciones controladas en campo. Estos se condujeron bajo el diseño de bloques completos aleatorios, con 10 repeticiones, la unidad experimental fue de 20 larvas de L. femoratus por recipiente, a los cuales se le había sembrado previamente Paspalum virgatum. La aspersión se realizó con atomizadores de manera homogénea sobre el suelo (Fig. 5). La lectura de mortalidad se realizó 20 días después de la aplicación. En el primer experimento se evaluaron tres especies de nematodos entomopatógenos, Heterorhabditis (Villa14); Heterorhabditis (Tumaco) y Steinernema sp., sobre larvas de III instar de L. femoratus, utilizando una suspensión de 500 JI/cm2 de cada especie. En el segundo experimento se evaluó 500 y 1000 JI/cm2 de H. (Villa 14) y 500 JI/cm2 de H. (Tumaco). CONCLUSIONES Este estudio ha permitido la cría masiva de Leucothyreus femoratus, determinar su biología y comportamiento y así facilitar las investigaciones con nematodos entomopatógenos para evaluar estos controladores bajo condiciones de plantaciones de palma de aceite. AGRADECIMIENTOS Los autores agradecen al Fondo de Fomento Palmero administrado por Fedepalma, al Departamento Administrativo de Ciencia, Tecnología e Innovación, Colciencias, contrato RC No. 745-2011 por su apoyo financiero y a la plantación Unipalma de los Llanos por su apoyo logístico. Figura 5. Pruebas de virulencia de nematodos entomopatógenos. A. Siembra de Paspalum virgatum. B. Aplicación de nematodos entomopatógenos