INMUNOANÁLISIS Q.F.B. Edgar Ceja Hernández

TÉCNICAS ANALÍTICAS INMUNOLOGICAS APLICADAS EN EL AREA DE ENDOCRINLOGIA. Q.F.B. Edgar Ceja Hernández

INMUNOANÁLISIS APLICADO A ENDOCRINOLOGA CLINICA. Bajo el nombre de test hormonales, test endocrinos y pruebas funcionales , en los últimos años se ha producido una notable afluencia de pruebas diagnosticas en el campo de la endocrinología clínica. Q.F.B. Edgar Ceja Hernández

INMUNOANÁLISIS Un inmunoanálisis es una prueba de laboratorio basada en la química mediante la que se detecta la presencia de una sustancia, o se determina en qué cantidad está presente, en una muestra de sangre o en otros líquidos corporales utilizando para ello una reacción inmunológica. Este tipo de análisis tienen una elevada sensibilidad y especificidad gracias a que se utilizan como reactivos anticuerpos y antígenos purificados. Q.F.B. Edgar Ceja Hernández

INMUNOANÁLISIS La propiedad que tienen las inmunoglobulinas de unirse a un Ag, la especificidad de esta unión y el hecho de que pueda ser visualizable por los fenómenos de precipitación, aglutinación y otros mecanismos indirectos hacen que estos métodos se empleen ampliamente. Calderón Pascacio Rocío V, “Cursos de métodos fisicoquímicos en Biotecnología”, Instituto de Biotecnología, Universidad Autónoma de México, 2007. http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/inmunoquimica.pdf Q.F.B. Edgar Ceja Hernández

Q.F.B. Edgar Ceja Hernández Calderón Pascacio Rocío V, “Cursos de métodos fisicoquímicos en Biotecnología”, Instituto de Biotecnología, Universidad Autónoma de México, 2007. http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/inmunoquimica.pdf Q.F.B. Edgar Ceja Hernández

Técnicas de Precipitación Cuando un antígeno en solución se agrega de manera progresiva a un antisuero potente, se forman precipitados del complejo antígeno-anticuerpo. El entrecruzamiento de antígenos y anticuerpos da origen a estructuras enrejadas tridimensionales que forman grandes agregados que precipitan. En estas técnicas las sustancias antigénicas son analizadas midiendo el precipitado visible de Ac-Ag. Su realización requiere que tanto el Ac como el Ag se encuentren en un medio fluido en el que sea posible la precipitación del complejo Ag-Ac. Calderón Pascacio Rocío V, “Cursos de métodos fisicoquímicos en Biotecnología”, Instituto de Biotecnología, Universidad Autónoma de México, 2007. http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/inmunoquimica.pdf Q.F.B. Edgar Ceja Hernández

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Técnicas de Aglutinación En estas técnicas se hacen visibles los complejos Ag-Ac por la aglutinación que producen los anticuerpos cuando el Ag forma parte o se ha unido artificialmente a la superficie de glóbulos rojos, plaquetas, leucocitos, partículas de látex, etc. Calderón Pascacio Rocío V, “Cursos de métodos fisicoquímicos en Biotecnología”, Instituto de Biotecnología, Universidad Autónoma de México, 2007. http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/inmunoquimica.pdf Q.F.B. Edgar Ceja Hernández

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Técnicas De Inmunoaglutinación. Cuando el antígeno se encuentra unido o formando parte de células, bacterias o partículas, la reacción Ag-Ac se puede detectar y cuantificar por el aglutinado celular o bacteriano formado. En estas técnicas se hacen visibles los complejos Ag-Ac por la aglutinación que producen los anticuerpos cuando el Ag forma parte del mismo. Esta técnica se emplea habitualmente para la identificación de los grupos sanguíneos y Rh Q.F.B. Edgar Ceja Hernández

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Técnica de Electroforesis La inmunoelectroforesis es una técnica que se realiza en dos fases. Primero se separa la mezcla de antígenos por electroforesis y posteriormente el antígeno que se desea detectar se hace reaccionar con un anticuerpo específico colocado en un pocillo lateral. Por difusión llegan a encontrarse los antígenos y el antisuero, apareciendo el complejo Ag-Ac visible en forma de líneas de precipitación que pueden ser estudiadas por comparación con un sistema estándar. En Inmunología clínica, esta técnica puede utilizarse en la identificación de las proteínas de mieloma. Calderón Pascacio Rocío V, “Cursos de métodos fisicoquímicos en Biotecnología”, Instituto de Biotecnología, Universidad Autónoma de México, 2007. http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/inmunoquimica.pdf Q.F.B. Edgar Ceja Hernández

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Técnicas de Inmunofluorescencia La fluorescencia es una propiedad de ciertas moléculas que, al ser irradiadas con energía electromagnética de longitud de onda adecuada, emiten radiación de longitud de onda característica permitiendo su cuantificación. Se utiliza fluoresceína para la realización de estas técnicas, el anticuerpo se marca detectándose, así, la formación del complejo Ag-Ac por la fluorescencia emitida. La inmunofluorescencia se utiliza esencialmente en la detección de auto-anticuerpos y anticuerpos contra antígenos de superficie de células y tejidos. Calderón Pascacio Rocío V, “Cursos de métodos fisicoquímicos en Biotecnología”, Instituto de Biotecnología, Universidad Autónoma de México, 2007. http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/inmunoquimica.pdf Q.F.B. Edgar Ceja Hernández

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Técnica de inmunoblotting La inmunoprecipitación es una de las técnicas inmunológicas más útiles cuando se asocia a electroforesis en gel de SDS-poliacrilamida. De este modo se pueden determinar la presencia y cantidad de un antígeno, el peso molecular relativo de una cadena polipeptídica, su síntesis y degradación, la interacción con proteínas, ácidos nucleicos u otros ligandos. Las técnicas de inmunoblotting son: Western Blot, Dot Blot y Slot Blot. Calderón Pascacio Rocío V, “Cursos de métodos fisicoquímicos en Biotecnología”, Instituto de Biotecnología, Universidad Autónoma de México, 2007. http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/inmunoquimica.pdf Q.F.B. Edgar Ceja Hernández

Tecnica de inmunoblotting Tecnica de inmunoblotting. Consiste en la separación lectroforética de proteínas virales y posterior revelado ccon anti-IgG marcada con peroxidasa Q.F.B. Edgar Ceja Hernández

Técnica de Radioinmunoanálisis (RIA) El radioinmunoensayo (RIA) se basa en la competencia que se establece, para unirse a anticuerpos específicos, entre la sustancia a cuantificar y cantidades conocidas de la misma sustancia marcada con un isótopo. Al establecerse esta competición resulta que a mayor cantidad de sustancia a cuantificar, menor será la cantidad de sustancia radiactiva que se une al anticuerpo y viceversa. Calderón Pascacio Rocío V, “Cursos de métodos fisicoquímicos en Biotecnología”, Instituto de Biotecnología, Universidad Autónoma de México, 2007. http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/inmunoquimica.pdf Q.F.B. Edgar Ceja Hernández

En ausencia de antígeno frío (no radioactivo), todos los complejos Ag-Ac serán radioactivos. La radioactividad medida es máxima En presencia de antígeno frío, éste compite con el antígeno radioactivo para unirse al anticuerpo. Por tanto la radioactividad medida es menor. El descenso es proporcional a la concentración de Ag frío presente en la muestra Q.F.B. Edgar Ceja Hernández http://www.ehu.eus/biomoleculas/isotopos/ria.htm

Técnica de Enzimoinmunoensayo (ELISA). La identificación de los complejos Ag-Ac, se hace mediante el empleo de enzimas, bien unidas al antígeno, o bien unidas al anticuerpo. La reacción antígeno-anticuerpo quedará inmovilizada y, por tanto, será fácilmente revelada mediante la adición de un substrato especifico que al actuar la enzima producirá un color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un espectrofotómetro o un colorímetro. Esta técnica se utiliza para la medida de hormonas, antígenos de la hepatitis y otras muchas sustancias que se encuentran a muy bajas concentraciones. Calderón Pascacio Rocío V, “Cursos de métodos fisicoquímicos en Biotecnología”, Instituto de Biotecnología, Universidad Autónoma de México, 2007. http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/inmunoquimica.pdf Q.F.B. Edgar Ceja Hernández

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Técnica de Nefelometría Esta técnica se basa en la detección de los complejos Ag-Ac, por la refracción que dichos complejos producen sobre rayos de luz que se hacen pasar por el tubo con el antígeno y el anticuerpo correspondiente. Habitualmente se utilizan rayos láser y se establece una relación entre la cantidad de luz que llega y la cantidad de complejos formados. Este procedimiento es rápido y sensible y es de utilidad en cuantificación de proteínas en suero y en otros líquidos biológicos. Calderón Pascacio Rocío V, “Cursos de métodos fisicoquímicos en Biotecnología”, Instituto de Biotecnología, Universidad Autónoma de México, 2007. http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/inmunoquimica.pdf Q.F.B. Edgar Ceja Hernández

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Quimioluminiscencia La quimioluminiscencia consiste en términos generales en la producción química de la luz. Los marcadores quimioluminiscentes son sustancias capaces de emitir luz cuando, al absorber la energía de una reacción química oxidativa, son colocadas en un estado de excitación electrónica. La emisión de luz se produce al volver a su estado inicial y la energía química absorbida se cede en forma de fotones fácilmente cuantificables con un fotodetector. Q.F.B. Edgar Ceja Hernández http://www.inmunologiaenlinea.es/index.php/03mmm-4

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Para finalizar… Es bien conocido que las aplicaciones de modernas técnicas químicas e inmunológicas para medir los constituyentes biológicos a bajas concentraciones constituye un significativo avance en la medicina moderna y ha transformado a la endocrinología de una gran disciplina descriptiva en otra mas cuantitativa. Q.F.B. Edgar Ceja Hernández

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