INMUNOABSORCION UNIDO A ENZIMAS ELISA INDIRECTO ELISA EN SANDWICH WESTERN – BLOT INMUNOBLOT INMUNOHISTOQUIMICA Es la técnica más utilizada para cuantificar.

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1 INMUNOABSORCION UNIDO A ENZIMAS ELISA INDIRECTO ELISA EN SANDWICH WESTERN – BLOT INMUNOBLOT INMUNOHISTOQUIMICA Es la técnica más utilizada para cuantificar casi cualquier proteína soluble en la mayor parte de los fluidos corporales Determinación cuantitativa de un antígeno o un anticuerpo por medio de una molécula indicadora, la cual se encuentra unida covalentemente a una enzima.

2 ELISA INDIRECTO Es la modalidad a utilizar cuando lo que se quiere es cuantificar la presencia de anticuerpos específicos en suero.

3 1.Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de Ags específicos. 2.Lavado con solución salina Tween 20 como agente tensioactivo (ph-7,2) para eliminar los Ags fijados deficientemente o no fijados. 3.Adición de Acs marcados (“conjugados”) con una enzima; si los Acs reaccionan con los Ags, el complejo quedará solubilizado. 4.Lavado para eliminar los Acs marcados que no hayan reaccionado.

4 5.Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. 5.Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.

5 APLICACIONES CLÍNICAS:  Enfermedades producidas por parásitos  Toxoplasmosis, Triquinosis, Tripanosomas, etc.  Enfermedades producidas por Micoplasmas  Enfermedades producidas por bacterias  Mycobacterium tuberculosis, brucelas, Estreptococos, Salmonelas, etc.  Enfermedades producidas por virus  Enfermedad de Newcastle, Peste porcina, Rotavirus, artritis vírica, Leucemia, etc.  Otras aplicaciones  Hormonas (GCH, Progesterona, Testosterona..)  Cuantificación de inmunoglobulinas (IgG, IgE, IgA)  Inmunopatología (Factor reumatoide, Inmunocomplejos circulantes)

6 ELISA EN SANDWICH Cuan lo que se va a cuantificar es una proteína sérica (no un anticuerpo). Se utiliza por ejemplo para cuantificar una citocina

7 WESTERN – BLOT Se realiza sobre soportes solidos (papeles de nylon o nitrocelulosa) sobre los que se han transferido e inmovilizado proteínas antigénicas previamente separadas por electroforesis en geles de acrilamida

8 INMUNOBLOT Esta técnica se realiza para el estudio de diferentes auto – anticuerpos, o para la detección de Ig E especifica frente a diferentes alérgenos.

9 INMUNOHISTOQUIMICA

10 INMUNOFLUORESCENCIA INMUNOFLORESCENCIA INDIRECTA (IFI) CITOFLUOROMETRÍA DE FLUJO

11 INMUNOFLORESCENCIA INDIRECTA (IFI)

12 CITOFLUOROMETRÍA DE FLUJO