Castro M., Cid K., & George-Nascimento M. CONSUMO DE OXÍGENO DE PERUMYTILUS PURPURATUS (Lamarck 1819) (Bivalvia; Mytilidae) SEGÚN EL PARASITISMO POR DIGENEA Y EFECTOS DE LA TEMPERATURA Y DEL CICLO DE EMERSIÓN-INMERSIÓN SOBRE LA LIBERACION DE CERCARIAS Castro M., Cid K., & George-Nascimento M. Departamento de Ecología, Facultad de Ciencias, Universidad Católica de la Santísima Concepción, Casilla 297, Concepción, Chile.

Introducción Las asociaciones parasitarias entre Moluscos y Digeneos son un fenómeno ampliamente extendido porque los primeros son el primer hospedador intermediario de los segundos. Parásitos de ciclo de vida complejos (más de un hospedador intermediario) Alteraciones fisiológicas en el hospedador molusco (Cheng 1967) Factores abióticos; importantes agentes en la liberación de cercarias Temperatura del agua de mar. Mayor cantidad de publicaciones en el sistema Gastropoda-Digenea (Meyrowitsch et al. 1991, Lo & Lee 1996, Lyholt et al. 1996, Abdul-Salam 1997, Cremonte et al. 2001, Fried et al. 2002, Mouritsen 2002, Fredensborg et al. 2005, Poulin 2006, Koprivnikar & Poulin 2009a, Morle 2011, Shim et al. 2013); + temperatura = + cercarías liberadas??!! Ciclos de marea y sus consecuencias en la liberación de cercarias 1. El parasitismo por Digenea es un fenómeno ampliamente extendido, ya que en ellos ocurre la reproducción asexual del parasito, de la que resulta la producción y liberación de cercarias. Sin embargo, las asociaciones molusco-parasito mas estudiadas son las que ocurren entre gastropodos y digeneos, ya que son las mas extendidas y primitivas, por lo que el conocimiento en el sistema bivalvia-Digenea es escaso.

Objetivos Evaluar el efecto del parasitismo por Digenea sobre el consumo de O2 de su hospedador P. purpuratus Determinar si la temperatura del agua de mar es o no un factor incidente en la liberación de cercarias al medio Evaluar el efecto de la duración de los ciclos de emersión-inmersión sobre la liberación de cercarias al medio

Material y métodos Sitio de recolección de ejemplares: desembocadura del río Biobío Mantención y selección de ejemplares; Mantención de ejemplares en laboratorio Fig. 1. Zona de muestreo de P. purpuratus Fig. 2. Simulación de marea alta para individuos recolectados Fig. 3. Simulación de marea baja para individuos recolectados

II. Identificación de individuos parasitados Acumulación de cercarias Figura 4. Ejemplar de P. purpuratus parasitado. En el fondo del envase se observa la acumulación de formas esféricas que corresponden a cercarias de Digenea

Medición de la tasa metabólica Muestras (n = 27) (12 parasitados – 15 No parasitados) Aclimatación (7 días – 15ºC – Sin alimentación) Medición (Fibox – Calibraciones – medición) Figura 5. Montaje de equipo para medición de consumo de O2

Temperatura del agua de mar Temperatura ambiente Temperatura 9 °C Temperatura 22 °C 6 7 8 Para cada experimento, se realizó el conteo del número de cercarias liberadas a temperatura ambiente, la cual variaba entre los 15 a 17° C, durante cinco días. Posteriormente, los mismos individuos fueron sometidos a una temperatura de 22° C, que se logró mediante un calefactor de acuario de 25 W, el cual se fijó en el fondo de la bandeja, bajo una rejilla que sostenía los frascos. La temperatura fue subida paulatinamente para no generar estrés a los individuos de P. purpuratus y luego mantenida constante durante cinco días. Antes de someter a los individuos a una temperatura baja de 9° C, se les dejó alrededor de 36 h a temperatura ambiente. Montajes para las distintas temperaturas utilizadas en el experimento

Extensión de los ciclos de marea Muestras (n = 14) (20 – 37 mm longitud valvar máxima) Tiempos de exposición (48 h, 24 h, 12 h, 6 h, 4 h, 2 h y 1 h) Secuencias opuestas (inmersión-emersión) Producción de cercarias (nº de cercarias * individuo * hora) En este experimento se utilizo solo 14 individuos parasitados de P. purpuratus que se encontraban entre los 20 – 37 mm de longitud valvar

Análisis estadísticos Todas las pruebas antes mencionadas fueron realizadas con los datos transformados al logaritmo en base decimal. Prueba de ´´t´´ Student para dos grupos para comparar la longitud valvar máxima de los ejemplares en los experimentos Análisis de la Covarianza: Consumo de oxígeno entre individuos parasitados y no parasitados en función del peso seco del chorito Análisis de la varianza de medidas repetidas: Diferencias en la tasa de liberación de cercarias en distintas temperaturas para el mismo grupo de hospedadores Análisis de la Covarianza: Diferencias en la tasa de liberación de cercarías respecto de dos ciclos opuestos de mareas

Resultados Consumo de oxigeno; La comparación de las pendientes de las regresiones de la tasa de consumo de oxígeno (µmol/O2/min) según el peso seco (g) de los ejemplares de P. purpuratus mostró diferencias no significativas entre los ejemplares con y sin parásitos (F(1, 23) = 1.28, P = 0.27). Además, no se encontraron diferencias entre los interceptos de dichas regresiones (F(1, 24) = 0.00, P = 0.99). Figura 9. Relación entre el log10 del peso seco (g) de P. purpuratus y el log10 del consumo total de oxígeno (µmol O2/min) en individuos parasitados (triángulo blanco) y no parasitados (cuadrado negro) con Digenea. La línea continua representa la tendencia de los no parasitados, mientras que la línea discontinua la tendencia de los individuos parasitados.

Efecto de la temperatura sobre la liberación de cercarias Variable N R² R² Aj CV   LIB, CERCARIAS 39 0,74 0,58 67,78 Cuadro de Análisis de la Varianza (SC tipo III) F,V, SC gl CM F p-valor Modelo 75355,23 38 1983,03 2,40 0,0005 BLOQUE 13441,23 12 1120,1 1,36 0,2523 TEMPERATURA 42106,62 2 21053,3 25,51 <0,0001 BLOQUE*TEMPERATURA 19807,38 24 825,31 Error Total Test:Tukey Alfa=0,05 DMS=28,14213 Error: 825,3077 gl: 24 Medias n 9 5,38 13 A Ambiente 36,54 B 22 85,23 C Letras distintas indican diferencias significativas(p<= 0,05) Análisis de la varianza de medidas repetidas

Extensión de los ciclos opuestos de mareas (inmersión-emersión) sobre la liberación de cercarias Ambas regresiones poseían pendientes que no eran significativamente distintas (F (1, 10) = 2.05, P = 0.183), así como tampoco sus interceptos (F (1, 11) = 0.04, P = 0.838). Producción promedio de cercarias en 14 ejemplares de P. purpuratus sometidos a dos experimentos con ciclos opuestos de inmersión-emersión. Los cuadrados negros representa a los individuos sometidos a ciclos de inmersión-emersión descendentes en el tiempo (48, 24, 12, 6, 4, 2 y 1 h). Los rombos blancos representa a los individuos sometidos a ciclos de inmersión-emersión ascendentes en el tiempo (1, 2, 4, 6, 12, 24 y 48 h).

Discusión y conclusión Ausencia de diferencias estadísticas en el consumo de oxigeno Ejemplar de P. purpuratus infectado con parásitos Mecanismos de compensación metabólica Tielens (1994) Mayor temperatura = Mayor liberación de cercarias Incremento en la transmisión de parásitos trematodos, derivado del aumento en la temperatura del agua de mar Ciclos de marea. Inmersión gatilla la liberación de cercarias al medio independiente de la duración del ciclo de marea Ejemplar de P. purpuratus sin infección parasitaria Tielens (1994) describe la capacidad de este tipo de parásitos para adaptarse a las condiciones impuestas por su hospedero e indica que éstos serían capaces de obtener su energía a través de vías metabólicas aeróbicas y anaeróbicas según lo necesiten, idénticas a las presentes en los estadios de vida libre de estos parásitos.

Gracias por la atención!!!

Figura 1. Ciclo de vida general de un digeneo