FERTILIZACION IN VITRO EN EL SIGLO XXI ¿ EN DONDE NOS ENCONTRAMOS. Dr FERTILIZACION IN VITRO EN EL SIGLO XXI ¿ EN DONDE NOS ENCONTRAMOS ? Dr. José Arturo Mora Rodriguez La Vida inicia aqui …

Historia Medicina Reproductiva 1960 - Estimulación ovarica con clomifeno y gonadotropinas 1970 - Secresión , sintesis , mecanismo de acción GnRH y gonadotropinas - Fertilizacion in Vitro 1980 - Agonista de GnRH y gonadotropinas - Criopreservación 1990 - Gonadotropinas recombinates - Diagnostico Genetico Preimplantacional - Inyección intracitoplasmatica del espermatozoide (ICSI) - Antagonista de GnRH 2000 - Maduracion de ovocitos in vitro - Celulas Madres Embrionarias - Transferencia de un solo embrión - Vitrificacion

Avances en Medicina Reproductiva Estimulacion Ovarica con antagonistas GnRH Transferencia de un solo embrión Transferencia Blastocisto Maduración ovocitos in-vitro Criopreservacion y vitrificación Diagnostico genetico preimplantacional

Diagnostico Genetico Preimplantación

Diagnostico Genetico Preimplantación (DGP) DGP es un procedimiento usado junto con la Fertilización In Vitro (FIV) en la que se somete a pruebas un embrión antes de ser transferido a la mujer. DGP fue descrito en 1990. DGP combina los ultimos avances en genetica molecular y la tecnologia de la reproducción asistida. H. Handyside et al., "Pregnancy from biopsied human preimplantation embryos sexed by Y-specific DNA amplification," Nature, 244:768-70, 1990.

Indicaciones para DGP Alteraciones Cromosomicas Reordenamientos cromosomicos Translocaciones Deleciones Cromosomicas Determinación de enfermedades ligadas al cromosoma X Enfermedades Monogenicas (Fibrosis quistica , ß-talasemias, anemia celulas falciformes , sindrome X fragil , miopatias) Perdidas gestacionales recurrentes Edad materna avanzada Parejas con >3 ciclos de VIF fallidos H. Handyside et al., "Pregnancy from biopsied human preimplantation embryos sexed by Y-specific DNA amplification," Nature, 244:768-70, 1990.

¿ Como se realiza el diagnostico genetico preimplantacional? Muy complejo Tecnicamente dificil M. Bielanska et al., "Fluorescence in situ hybridization of sex chromosomes in spermatozoa and spare implantation embryos of a Klinefelter 46,XY/47,XXY male, " Human Reproduction, 15:440-4, February 2000.

¿ Como se realiza el DPG ? Estimulación Ovarica FIV Biopsia blastomera dia 3 Transferencia embrión sin alteración Analisis Genetico Resultado Bebe cromosomicamente normal

DPG ofrece 2 tipos de analisis Reaccion Cadena Polimerasa (PCR) Hibridación Fluorescente In Situ (FISH). M. Bielanska et al., "Fluorescence in situ hybridization of sex chromosomes in spermatozoa and spare implantation embryos of a Klinefelter 46,XY/47,XXY male, " Human Reproduction, 15:440-4, February 2000.

Beneficios DGP Incrementa tasa Implantación. Reduce Perdidas Gestacionales. Reducción en la posibilidad de tener un niño con aneuploidia. M. Bielanska et al., "Fluorescence in situ hybridization of sex chromosomes in spermatozoa and spare implantation embryos of a Klinefelter 46,XY/47,XXY male, " Human Reproduction, 15:440-4, February 2000.

Alternativas DPG Concebir naturalmente y control prenatal durante embarazo. Adopción. M. Bielanska et al., "Fluorescence in situ hybridization of sex chromosomes in spermatozoa and spare implantation embryos of a Klinefelter 46,XY/47,XXY male, " Human Reproduction, 15:440-4, February 2000.

Futuro DGP Mejorar los metodos para obtener un diagnostico preciso. DPG es una promesa para el futuro , las tecnicas y prubas geneticas si se perfeccionan. DPG se convertira en una rutina en los proximos años.

Conclusiones DPG es un procedimiento efectivo para prevenir nacimientos de niños afectados. DPG en una aneuploidia es eficaz y da como resultado una alta tasa de tener bebes en casa cuando se aplique en determinadas categorias de pacientes .

MADURACIÓN DE OVOCITOS IN VITRO

Maduración in vitro „Ovocitos pueden finalizar su maduración meiotica in vitro 24 – 48 horas“ … Edwards R. Early Stages of fertilization in vitro of Human oocytes matured in vitro . Nature. Vol.221 February 15,1969

Maduracion de ovocitos Tecnica que permite evolución de ovocitos Metafase I (MI) y vesicula germinal (VG) al estadio de metafase II (MII) en medios de cultivos especificos Kwang-Yul Cha . Maturation in vitro of immature human oocytes for clinical use . Human Reproduction Update 1998, Vol. 4, No. 2 pp. 103–120

Desarrollo MIV 1983 Veeck primer nacimiento después MIV. 2000 Cha Nacimiento de 20 niños sanos despues MIV 2003 Mikkelsen Nacimiento de 33 niños sanos después MIV Hoy >300 niños despues MIV Kwang-Yul Cha . Maturation in vitro of immature human oocytes for clinical use . Human Reproduction Update 1998, Vol. 4, No. 2 pp. 103–120

Base MIV Recuperación de ovocitos de folículos antrales antes selección y atresia. . . Dia 3 Dia 8 - 12 d>10mm Kwang-Yul Cha . Maturation in vitro of immature human oocytes for clinical use . Human Reproduction Update 1998, Vol. 4, No. 2 pp. 103–120

PRINCIPALES DIFERENCIAS MADURACIÓN IN VITRO La recuperación de ovocitos inmaduros y su maduración “in vitro” (MIV) constituye un tratamiento potencialmente útil para ciertos tipos de pacientes con problemas de esterilidad PRINCIPALES DIFERENCIAS FIV MIV Tratamiento estimulacion Si No/ Minimo Recuperacion de ovocitos Maduros Inmaduros SHO 7-15% No No. Embriones Evolutivos 7 3 Tasa embarazo 45% 20-25%

Indicaciones MIV SHO Criopreservacion de ovocitos ( Oncologia ) Baja respondedora Falla implantación

Ventajas MIV Evitar efectos secundarios , incluyendo SHO Tratamiento Simple Disminuye costos $$

IMSI : Analisis Morfologia Microscopia electronica : - 20 000-180000X - costo!!!! IMSI: - 6600 à 10 000X - Diagnostico y tratamiento!!!

IMSI Analisis de la cabeza espermatica (Bartoov, 2002) Cromatina: Normal 0-1 vacuola Anormal: si una o mas vacuolas ocupan mas del 4% del area

IMSI Microscopio invertido con condensador Normaski Micromanipulador automatizado Objectivo 100X con aceite inmersion Camara

IMSI Inyección de espermatozoides con apariencia normal y grandes vacuolas afectaria el ciclo de FIV ? Impacto de las vacuolas en el desarrollo embrionario?

Intra-cytoplasmic of morphologically selected sperm injection IMSI Intra-cytoplasmic of morphologically selected sperm injection 1 1 2 X 300 2 X 6600

IMSI: cromatina Sin vacuola Una vacuola

Espermatozoides con vacuolas de diferente tamaño IMSI Espermatozoides con vacuolas de diferente tamaño

IMSI: cromatina anormal X 300 X 6600

MSOME E IMSI MSOME Motile Sperm Organelle Morphology Evaluation IMSI Intracitoplasmatic Morphologically Selected Sperm Injection Morfologia 400 aumentos Morfologia 6000 aumentos Bartoov Benjamin . Intracitoplasmatic Morphologically Selected Sperm Injection . Human Reproduction Vol.20, No.1 pp. 185–190, 2005

Indicaciones Factor masculino severo Pacientes con fragmentacion DNA Pacientes con falla en implantación Fallos previos a FIV , ICSI u aborto repetición. Bartoov Benjamin . Intracitoplasmatic Morphologically Selected Sperm Injection . Human Reproduction Vol.20, No.1 pp. 185–190, 2005

Resultados IMSI Incrementa la tasa de embarazo e implantación Reduce la tasa de aborto Incrementa la probabilidad de obtener un producto sano Pacientes con falla implantación Bartoov Benjamin . Intracitoplasmatic Morphologically Selected Sperm Injection . Human Reproduction Vol.20, No.1 pp. 185–190, 2005

BIOLOGÍA CELULAR REPRODUCTIVA Mientras un brazo de esta ciencia se ha dedicado a mejorar las condiciones generales en que se dan estos procedimientos (assisted hatching, cocultivo, ICSI, etc.) Otros se ha adentrado en la investigación del material que da origen al ser humano (células germinales)

Células madre embrionarias Se obtienen de embriones que han sido donados o aquellos que dejan de crecer o degeneran durante los procedimientos de Reproducción Asistida.

Extracción de blastómeras de embriones humanos

Derivación de células madre a partir de blastómeras Ovocito fertilizado Embrión de 8-10 cel. Blastocisto Blastómeras en cultivo Cel. Madre embrionarias pluripotenciales

Importancia de las células madre embrionarias. Son de gran interés médico y científico por su habilidad para dar lugar a cualquier tipo de célula del cuerpo humano. Ayudan al estudio de las primeras etapas del desarrollo embrionario, que no pueden ser estudiadas directamente en humanos o en el útero. Para probar el uso de nuevos fármacos y protocolos de tratamientos.

Al existir controversia con el uso de células madre embrionarias, debido a la “destrucción” de embriones…….

Alternativas para obtener células madre embrionarias sin destruir embriones Transferencia Nuclear Clonación Terapéutica

Espermatozoides y ovocitos a partir de células madre Las células madre pueden tener un papel prometedor en el campo de la medicina reproductiva. Diversos trabajos han demostrado que son una fuente viable para obtener ovocitos y espermatozoides tanto en modelos animales como en humanos.

Células madre: Un paso más en la reproducción asistida. Se estima que el 50% de los pacientes en técnicas de reproducción asistida necesitan algún tipo de donación de gametos. En roedores, se han podido obtener ovocitos y espermatozoides a través de células madre embrionarias, dando lugar a descendencia. Estos hallazgos pueden tener importantes implicaciones en el campo de la medicina reproductiva, ya que se podría evitar la donación.

Reproducción asistida vs clonación terapéutica El objetivo es producir un embrión que será implantado en la madre, con la finalidad de dar a luz un nuevo ser. Clonación terapéutica El objetivo es producir un embrión para generar células madre embrionarias. Dichas células pueden ser utilizadas en diferentes terapias, sin temor de que puedan ser rechazadas por el receptor

Clonación Terapéutica Tomado de: The science of life cloning by Davide Prentice. http://www.leaderu.com/science/stem-cell-cloning-slideshow.pdf [accesado 14/08/2010]

Exactamente en donde esta la clínica donde hizo su tratamiento?