“Implementación de una técnica de bajo costo para la detección de mutaciones en el gen BRCA1 relacionadas con el desarrollo del cáncer de mamas” Dr. Alejandro Amoroso Facultad de Ciencia Universidad San Sebastián 2016

Incidencia El cáncer de mamas afecta al 10% de las mujeres Entre el 5-10% son atribuibles a susceptibilidad genética Las mujeres con mutaciones deletéreas en BRCA1, tienen un riesgo a lo largo de su vida de entre un 37 a un 85% de desarrollar cáncer, convirtiendo a estas mutaciones en los predictores de cáncer de mama más reconocidos.

BRCA1 es un gen complejo

BRCA1-BARD1 heterodimer Coordinates a diverse range of cellular pathways such as: DNA damage repair Ubiquitination and transcriptional regulation to maintain genomic stability Regulates centrosomal microtubule nucleation Required for normal cell cycle progression from G2 to mitosis Required for appropriate cell cycle arrests after ionizing irradiation Involved in transcriptional regulation of P21 in response to DNA damage Required for FANCD2 targeting to sites of DNA damage May function as a transcriptional regulator Inhibits lipid synthesis Contributes to homologous recombination repair (HRR) Component of the BRCA1-RBBP8 complex which controls cell cycle G2/M checkpoints on DNA damage Acts as a transcriptional activator

BRCA1 es un gen supresor de tumores Participa en reparación del DNA Regulación del ciclo celular Apoptosis

Es importante detectar mutaciones en BRCA1 La bajas tasas de supervivencia al cáncer de mama observadas en los países poco desarrollados pueden explicarse principalmente por la falta de programas de detección precoz y de servicios adecuados de diagnóstico y tratamiento.

El análisis genético permite mejorar la prevención y el diagnóstico precoz Se han reportado mutaciones dispersas a lo largo de todos los exones de BRCA1 Los test genéticos requiere de un análisis que cubra la región codogénica completa La técnica más utilizada es la secuenciación del DNA

Secuenciación de DNA

El análisis genético permite mejorar la prevención y el diagnóstico precoz Las técnicas de secuenciación del DNA consumen mucho tiempo y tienen altos costos Creciente aumento en la demanda por estos exámenes Existen grandes diferencias en la frecuencia de las distintas mutaciones dependientes de la etnia

Necesidad de un test rápido, seguro, de bajo costo que considere los componentes étnicos de las poblaciones analizadas

Propuesta Desarrollar un método de diagnóstico, utilizando una “nueva” técnica de análisis molecular llamada HRM (High-Resolution Melting), basada en el análisis de las curvas de desnaturación de DNA de amplicones específicos, generados mediante qPCR (quantitative Polimerase Chain Reaction) a partir de muestras de DNA genómico.

PCR

HRM (High-Resolution Melting)

Objetivo “Desarrollar un protocolo para detectar mutaciones en el gen Brca1, relacionadas con un alto riesgo de desarrollar cáncer de mama en la población chilena, utilizando la tecnología de bajo costo HRM-qPCR”. Objetivos Específicos: Montar el ensayo de HRM-qPCR para la detección de mutaciones en el gen BRCA1, utilizando muestras de DNA estándar. Determinar las mutaciones recurrentes en el gen Brca1 en la población chilena con cáncer de mama hereditario, mediante HRM y secuenciación de DNA.

Montar el ensayo de HRM utilizando muestras de DNA estándar

Determinar las mutaciones recurrentes en el gen Brca1 en la población chilena con cáncer de mama hereditario.

Test predictor de riesgo de cáncer de mama Método sensible Rápido Bajo costo Fácil implementación