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Química Biológica I - Bioquímica I
Ácidos Nucleicos: desnaturalización, curvas Cot, métodos de purificación, cuantificación y secuenciamiento
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Desnaturalización del DNA
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Purificación de ácidos nucleicos
Instituto de Bioquímica y Biología Molecular Facultad de Ciencias Exactas - Universidad Nacional de La Plata Purificación de ácidos nucleicos
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Instituto de Bioquímica y Biología Molecular
Facultad de Ciencias Exactas - Universidad Nacional de La Plata
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Lisis de las células y solubilización del ADN
Instituto de Bioquímica y Biología Molecular Facultad de Ciencias Exactas - Universidad Nacional de La Plata Purificación de ADN : Lisis de las células y solubilización del ADN Aplicación de métodos enzimáticos y/o químicos que remuevan proteínas, ARN y otras macromoléculas
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Plásmidos Instituto de Bioquímica y Biología Molecular
Facultad de Ciencias Exactas - Universidad Nacional de La Plata Plásmidos
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ADN total Instituto de Bioquímica y Biología Molecular
Facultad de Ciencias Exactas - Universidad Nacional de La Plata ADN total
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PURIFICACIÓN DE ÁCIDOS NUCLÉICOS
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Pasos fundamentales en la purificación
Instituto de Bioquímica y Biología Molecular Facultad de Ciencias Exactas - Universidad Nacional de La Plata Purificación de RNA Pasos fundamentales en la purificación efectiva disrupción de células o tejido desnaturalización de complejos nucleoproteicos inactivación de la ribonucleasa (RNAasa) endógena purificación del RNA de DNA y proteínas contaminantes El principal problema en la purificación es que el RNA es muy susceptible a la degradación. Todos los métodos de purificación emplean agentes desnaturalizantes de la RNAasa Métodos más utilizados: 4 M tiocianato de guanidinio fenol y SDS (plantas) combinación de ambos
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ARN Instituto de Bioquímica y Biología Molecular
Facultad de Ciencias Exactas - Universidad Nacional de La Plata ARN
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electrophoresis resolves DNA fragments of different size
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Facultad de Ciencias Exactas - Universidad Nacional de La Plata
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Instituto de Bioquímica y Biología Molecular
Facultad de Ciencias Exactas - Universidad Nacional de La Plata
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Visualization of restriction fragments separated by gel electrophoresis
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Facultad de Ciencias Exactas - Universidad Nacional de La Plata
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Instituto de Bioquímica y Biología Molecular
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7.1 Restriction enzymes cut DNA molecules at specific sequences
Figure 7-5a
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7.1 Restriction enzymes cut DNA molecules at specific sequences
Figure 7-5b
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7.1 Selected restriction enzymes
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7.3 Pulsed-field gel electrophoresis separates large DNA molecules
Figure 7-26
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Identifying, analyzing, and sequencing DNA
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Analyzing specific nucleic acids in complex mixtures
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7.5 Southern blotting detects specific DNA fragments
Figure 7-32
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Sondas Marcadas radioctivamente
Instituto de Bioquímica y Biología Molecular Facultad de Ciencias Exactas - Universidad Nacional de La Plata Sondas Marcadas radioctivamente Marcadas no radioctivamente ( Digoxigenina, avidina) Se pueden obtener por: Sintesis química Extensión usando usando primers al azar PCR
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Oligonucleotide probes are designed based on partial protein sequences
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7.5 Northern blotting detects specific mRNAs
Figure 7-33
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The membrane-hybridization assay
Double stranded DNA Melt Single-stranded DNA DNA binds to filter Filter Incubate with labeled DNA Hybridized complemetary DNAs Wash away labeled DNA that did not hybridize to DAN bound to filter Figure 7-17 Perform autoradiography
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Identification of a specific clone from a phage library by membrane hybridization
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Secuenciación de DNA
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- Método Químico (Maxam & Gilbert) - Método Enzimático (Sanger)
a) Manual b) Automático
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7.3 DNA sequencing: the Maxam-Gilbert method
Figure 7-27
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Método Enzimático (Sanger)
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Secuenciación automática de DNA
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7.4 Bioinformatics Bioinformatics is the rapidly developing area of computer science devoted to collecting, organizing, and analyzing DNA and protein sequences Using searches based on homologous sequences, stored sequences suggest functions of newly identified genes and proteins Homologous proteins involved in genetic information processing are widely distributed
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7.4 Comparative analysis of genomes reveals much about an organism’s biology
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7.4 The C. elegans genome encodes numerous proteins specific to multicellular organisms
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