PETRIFILM SALMONELLA EXPRESS Curso optativo: Microbiologia de los alimentos Alumna: Neira, Mailen Guadalupe

Introducción La salmonelosis es reconocida mundialmente como la mayor causa de diarrea en humanos, siendo los productos avícolas uno de los mayores vehículos de la infección. Es una enfermedad producida por la ingestión de alimentos y líquidos contaminados con desechos y productos de animales, se caracteriza por una intoxicación o infección intestinal. En general, se necesita una inoculación relativamente grande, entre 105 y 106 organismos. Estas infecciones son mas frecuente en países en vías de desarrollo donde las condiciones higiénico sanitarias de los alimentos como del agua son deficientes.

Salmonella Enterobacteria Bacilo gram (-) Anaerobio facultativo No desarrollan capsula, excepto la especie Salmonella tiphy No esporulados Posee flagelos peritricos No fermentadores de lactosa Oxidasa (-) Catalasa (+) pH de crecimiento optimo 3,7 - 9,5, se desarrolla en un ambiente con aw=0,93 Son bacterias ubicuas teniendo como principal reservorio el intestino de animales.

Transmisión de Salmonela La principal puerta de entrada es la vía oral. Consumo de alimentos o aguas contaminados con la bacteria. Cualquier alimento se puede contaminar si el ambiente o los utensilios no están debidamente lavados. Transmisión sexual: el hombre es el único reservorio, S. typhi. Contacto directo con heces de una persona o animal infectado y transfiriendo las bacterias por el ciclo ano-mano-boca. El mayor riesgo proviene de los portadores crónicos sanos (personas que albergan la bacteria por 12 meses o mas), responsables de transmitir la bacteria en la mayoría de los casos.

Salmonelosis tifoidea Salmonelosis no tifoidea Producida por S. typhi y S. paratyphi A/B/C, especificas de humanos. Ingestión de agua y alimentos contaminados con heces de hombre Invasión no inflamatoria Establece infección sistémica. Periodo de incubación de 3- 21 días. Se distingue por la hipertrofia de las placas de peyer y los ganglios mesentéricos. Fiebre prolongada 38,5 – 40,5ºC con escalofríos, cefalea, dolor de garganta, tos, debilidad, anorexia, mareos, mialgias. Fiebre entérica presenta exantema maculo papuloso, estado toxico caracterizado por síntomas neuropsiquiatricos. Diarrea mas frecuente en personas con SIDA y niños menores de 1 año. Tratamiento hay que rehidratar, administrar ATB via oral o intravenosa. Producida por S. typhimurium y S. enteritidis, infectan varias especies. Invasión inflamatoria Se establece locamente tracto intestinal, ciego, y órganos internos. Se relaciona con estaciones lluviosas en climas tropicales. Indistinguible de otras gastroenteritis producidas por virus u otras bacterias patógenas. Periodo de incubación de 6 - 48hs luego de la ingesta. Fiebre de 38 - 39ºC, nauseas y vomito, diarrea de heces blandas no sanguinolentas de volumen moderado, calambre abdominales. Cura espontáneamente, la diarrea desaparece entre 3 – 7 días y la fiebre a las 72hs.

Patogenia de Salmonella Son bacterias invasoras y enterotoxigénicas. La infección se localiza principalmente en el íleo terminal y en el intestino grueso. Reservorio natural: tubo digestivo de aves, cerdos y bovinos. Vehículo: huevos, carne, portadores, manipuladores.

Determinación de Salmonella Métodos convencionales Petrifilm Salmonella Express System 25 gr muestra en bolsa polietileno + 225ml de APB Incubar 18hs a 37ºC Transferir la muestra enriquecida a caldos TT y caldo RV. Incubar 24 hs a 37ºC y 42ºC. Siembre por estriado cada caldo seleccionado en placas de agar SS. Incubar 24hs a 37ºC. Seleccionar las colonias sospechosas Transfiera las presuntas colonias positivas a tubos de prueba TSI y LIA. Combine la muestra y los medios 3M™ base para enriquecimiento de Salmonella más 3M™ Suplemento para enriquecimiento de Salmonella. Incubar 18hs a 41,5ºC Transfiera la muestra enriquecida a R-V R10. Incube 8 hrs. a 41,5ºC. (Evite este paso en alimentos procesados con nivel bajo de micro-flora) Hidrate la placa, transfiera la muestra y siembre por estriado en el gel. Incube 24. a 41,5 0C. Marcar con un circulo los presuntos (+) en la película superior. Incubar 24 hrs. a 37ºC

Métodos convencionales Petrifilm Salmonella Express Sistem Se transfieren las presuntas colonias a pruebas serológicas y bioquímicas adicionales para obtener una confirmación. Ensayos de aglutinación en placa con antisuero polivalentes Enviar las cepas al Instituto Nacional de enfermedades infecciosas en Bs.As. Para determinar serovariedad TIEMPO TOTAL DE CONFIRMACION: 88 – 124hs. Tiempo total a neg: 40-44hs (alimentos procesados, con bajo contenido en microflora) 48-52hs (alimentos no procesados, con altos niveles de microflora). Resultados confirmados bioquimicamente: Añade el disco de confirmación a la placa e incube 4hs a 41,5ºC. TIEMPO TOTAL HASTA LA CONFIRMACION: 44 – 48 HS (alimentos procesados) 52 – 56 HS (alimentos no procesados) Métodos convencionales Petrifilm Salmonella Express Sistem

Placas petrifilm para Salmonella Placa y disco de confirmacion 3M petrifilm Salmonella express. Suplemento y enriquecimiento base para Salmonella Difusor plano de 3M petrifilm. Placas petrifilm para Salmonella

Método de petrifilm 3M Petrifilm Salmonella Express System (SALX) es utilizado como prueba cualitativa para la rápida detección y confirmación bioquímica de Salmonella en alimentos y muestras ambientales reemplazando la metodología tradicional. Medio listo para usar: Fácil de usar No requiere de equipos especiales Permite gran uniformidad de resultados. Mayor consistencia si la comparamos contra la variabilidad asociada a la preparación de agar, la fórmula estandarizada de 3M mejora la consistencia entre los técnicos, los turnos y las plantas. Elimina la necesidad de adquirir, preparar y almacenar placas de agar maximiza la eficacia y productividad. Mayor vida util. Plato compacto/disco reducen los desechos, el espacio. Todo en un solo método. Un solo proceso de enriquecimiento para alimentos procesados con baja carga microbiana. - Mas rápido para resultados bioquímicos confirmados. Colonias confirmadas en un plato.

Colonias rojas aisladas con zonas amarillas y asociadas a burbujas de gas. Colonias aisladas rojas solo en zonas amarillas. Flora de acompañamiento colonias azul, azul verdosa. Las colonias presuntivas (+) marcadas con un circulo son de color azul o azul oscuro/negro con un precipitado azul luego de la adición del disco de confirmación 3M Petrifilm SALX. Estas colonias marcadas con un circulo están bioquímicamente confirmadas como (+) para Salmonella.