Técnicas moleculares II “Tecnología de Proteínas”

Presentación del tema: "Técnicas moleculares II “Tecnología de Proteínas”"— Transcripción de la presentación:

1 Técnicas moleculares II “Tecnología de Proteínas”

2 Estructura y características de las proteínas

3 Propiedades físico-químicas de los aminoácidos

4 Procariotas vs Eucariotas: técnicas de extracción
Ruptura mecánica directa Alta presión Sonicación Bolitas de vidrio Soluciones hipotónicas Detergentes

5 Fraccionamiento subcelular
Centrifugación Diferencial vs. Centrifugación en gradiente

6 Técnicas electroforéticas: Isoelectroenfoque (relación carga/masa)

7 Técnicas electroforéticas: SDS-PAGE (independizarse de la carga)

8 SDS-PAGE ¿Por qué vemos las bandas proteicas en el gel? ¿Una banda en un gel SDS-PAGE corresponde a un único polipéptido?

9 Técnicas electroforéticas: Geles bidimensionales
Los puntos rojos son proteínas comunes Los puntos azules proteínas específicas

10 Técnicas que involucran la utilización de anticuerpos
Western blot Inmunohistoquímica Inmunoprecipitación ELISA

11 Western blot

12 Inmunohistoquímica

13 Técnicas cromatográficas

14 (High-performance liquid chromatrography)
Técnicas cromatográficas: tipos de columnas HPLC (High-performance liquid chromatrography)

15 Extracción de proteínas totales
Introducción a los TP 3, 4 y 5 Extracción de proteínas totales Cuantificación utilizando método de Bradford Chequeo del extracto mediante electroforesis en SDS-PAGE Análisis de una proteína pura mediante Western blot

16 TP nº 3: Extracción y cuantificación de extractos proteicos
Extracción de proteínas a partir de distintos tejidos, utilizando métodos mecánicos y solución de lisis con detergentes. Cuantificación de proteínas por métodos colorimétricos: BRADFORD Curva de calibración Interpolar la absorbancia de las muestras en la curva

17 TP nº 4: SDS-PAGE y tinción con Coomasie blue
Gel de distintas concentraciones de la proteína IgG Gel de proteínas extraídas de distintos tejidos de rata Rf = Dc/Dt Graficar log(PM) vs Rf para el ladder Extrapolar el Rf de las bandas de las muestras en la curva

18 TP nº 5: Western blot