Geles de PAGE-SDS de la purificación de la LDH

Presentación del tema: "Geles de PAGE-SDS de la purificación de la LDH"— Transcripción de la presentación:

1 Geles de PAGE-SDS de la purificación de la LDH
Se pospone la entrega del reporte Geles de PAGE-SDS de la purificación de la LDH Grupo Datos de peso molecular del std Para calcular el peso molecular de una proteína en un gel Comentarios Geles equipos 1 a 4 Geles equipos 5 a 8

2 Std de peso molecular de proteínas
Hicimos un gel de Tris

3 Std preteñido como curva patrón
Para encontrar en donde está la banda de interés hace lo siguiente, A: Construir la curva estándar de proteína como se ilustra en la Fig., para ello hay que graficar el log del peso molecular de cada uno de los estándares contra el Rf de su corrimiento. recuerden que el Rf es: Rf =distancia recorrida por la banda distancia migrada por el colorante B: Al tener la curva interpolar en la gráfica el log del peso molecular del monómero de LDH y obtener el Rf, de este obtener la distancia recorrida por la LDH

4 Comentarios Calculen con los datos que se les dieron del estándar el lugar en el gel en donde estaría la LDH. En general los que realizaron la purificación por cromatografía de afinidad si se ven proteínas en el gel, excepto en el equipo 2 En los equipos que realizaron la purificación por cromatografía de intercambio iónico si se ve que tienen proteína, muy poquita pero si hay, excepto en el equipo 5. El equipo que realizo la purificación secuencial intercambio iónico y afinidad, se ven bandas en todas las purificadas, si bien no se ve un cambio en el número de bandas de cada una de las fracciones purificadas ni en número. El equipo 7 y el 2 centrifugaron en Amicon para desalar, nos tienen que decir cual es la fracción del amicon que cargaron ( el carril). Jueguen con los contrastes del gel, el tamaño, si lo quieren poner en escala de grises, todo para que puedan encontrar sus bandas. Recuerden no importa que impriman en chiquito o grande, como el Rf es un índice no importa como lo impriman se mantiene la relación entre la distancia recorrida y el tamaño del gel. Como aún no revisamos los resultados en clase, posponemos la entrega del reporte hasta realizar la discusión de estos resultados

5 Corrimiento electroforético en geles de poliacrilamida-SDS de las fracciones de la purificación de la LDH. Mioglobina Mioglobina Equipo 1 Equipo 2 Mioglobina Mioglobina Equipo 3 Equipo 4

6 Corrimiento electroforético en geles de poliacrilamida-SDS de las fracciones de la purificación de la LDH. Mioglobina Mioglobina Equipo 5 Equipo 6 Mioglobina Mioglobina Equipo 7 Equipo 8 Si tienen proteína en sus fracciones purificadas!, Muy bien!