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Resultados de el corrimiento de las fracciones de proteína de la purificación de LDH en geles de poliacrilamida-SDS Semestre 2010-2 Marzo, 2010.

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Presentación del tema: "Resultados de el corrimiento de las fracciones de proteína de la purificación de LDH en geles de poliacrilamida-SDS Semestre 2010-2 Marzo, 2010."— Transcripción de la presentación:

1 Resultados de el corrimiento de las fracciones de proteína de la purificación de LDH en geles de poliacrilamida-SDS Semestre Marzo, 2010

2 Stds El que usamos

3 Std preteñido Para encontrar en donde está la banda de interés se hace una curva estándar. Como tienen los pesos moleculares de las proteínas en el estándar y la migración de estas en el gel pueden obtener un gráfico como el de la derecha y en el interpolar el peso molecular y conocer en que posición debe estar la proteína

4 El gel que obtuve con mis muestras COMENTARIOS: Aquí hice la purificación secuencial primero intercambio iónico y luego a lo que salió lo cargue en una columna de afinidad Sobeida

5 Comentarios y peticiones Con su gel obtengan los Rfs del estándar y hagan la gráfica como la de la diapositiva anterior Calculen en donde estaría su proteína Señálenla en su gel. En algunos casos cuesta trabajo ver lo que tienen en sus carriles (PRIMERA TINCIÓN, REACTIVO PROPORCIONADO EN EL LAB 307), por lo que teñí los geles con una solución que tengo en mi laboratorio, también a base de Coomasie (SEGUNDA TINCIÓN). RECUERDEN SON 10 POZOS O CARRILES. Identifiquen que fracción colocaron en cada carril

6 Equipo 1 y 3 Cromatografía de intercambio iónico a pH 8.0 Primera tinción Segunda tinción std

7 Equipo 2. Cromatografía de afinidad Primera tinción Segunda tinción F3 F4 FPA1 FPA2 FPA3 FPB2 Std Colectaron las fracciones purificada A (FPA) y la B (FPB) colectando en fracciones de 200 uL. Por eso se ven tres fracciones de A y solo pudieron cargar una fracción de B que fue la FPB2

8 Equipos 4 y 6 Equipo 4 cromatografía de afinidad Equipo 6 intercambio iónico a pH 3.0 ( Tuvieron problemas al cargar y tomaron por eso casi no se ve ) Std F2 F3 FPA FPB

9 Equipos 5 y 7 Primera tinción Segunda tinción Intercambio iónico pH 3.0 FPA FPB Cromatografía de afinidad FP


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