TECNICAS PARA ANALISIS DE ACIDOS NUCLEICOS

Presentación del tema: "TECNICAS PARA ANALISIS DE ACIDOS NUCLEICOS"— Transcripción de la presentación:

1 TECNICAS PARA ANALISIS DE ACIDOS NUCLEICOS

2 ELECTROFORESIS La electroforesis de ácidos nucleicos en geles de agarosa, permite separar fragmentos de DNA de diferente tamaño. Sin embargo, no se puede saber en cuál de los fragmentos se encuentra el gen o la secuencia de DNA que se busca.

3 HIBRIDACION DE ÁCIDOS NUCLEICOS

4 El DNA puede sufrir un proceso reversible de separación y reasociación de hebras
DNA en estado nativo Denaturado Renaturado

5 Acido nucleico inmovilizado
Sonda marcada Acido nucleico inmovilizado

6 Paso 1: Separación de fragmentos de RNA por electroforesis.

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8 Paso 2: Transferencia del RNA al filtro o membrana

9 Acido nucleico inmovilizado
Paso 3: Hibridación con la sonda específica complementaria Sonda marcada Acido nucleico inmovilizado

10 Paso 4: Lavado y detección de la sonda marcada

11 La hibridación con sondas específicas permite determinar la identidad de un fragmento de DNA o RNA

12 La hibridación en condiciones de mayor estringencia garantiza una mayor especificidad en la interacción.

13 TIPOS DE HIBRIDACION Tipo de interaccion: DNA – DNA / DNA – RNA/ RNA – RNA Hibridación en filtro: Southern Northern Colony Hibridization Dot-blot 3. Hibridacion en solución : substractiva + columna de hidroxiapatita 4. Hibridacion in situ

14 Colony hibridization Por hibridación en colonia, se puede identificar cuáles de las colonias recombinantes obtenidas, tiene clonado un fragmento de DNA en particular.

15 SECUENCIAMIENTO Uso de dideoxinucleótidos (ddNTPs)
4 reacciones por separado, en paralelo. Separación de fragmentos producidos por electroforesis en gel de secuenciamiento Animación (Lodish)

16 Se realizan 4 reacciones por separado
Oligonucleótido o Primer Templado Figure 7-29a