La descarga está en progreso. Por favor, espere

La descarga está en progreso. Por favor, espere

PARTE II METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE CAPÍTULO 12 ELECTROFORESIS McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados.

Presentaciones similares


Presentación del tema: "PARTE II METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE CAPÍTULO 12 ELECTROFORESIS McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados."— Transcripción de la presentación:

1 PARTE II METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE CAPÍTULO 12 ELECTROFORESIS McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados.

2 CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS PARTE II. METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE Figura Elementos necesarios para una electroforesis. En la imagen se aprecian los elementos que se requieren para el corrimiento electroforético y visualización del gel. McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados.

3 CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS PARTE II. METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE Figura Cámaras de electroforesis. A) En las cámaras de electroforesis vertical el corrimiento de la muestra sigue la gravedad, ya que el polo positivo de encuentra en la parte inferior de la cámara. B) En la electroforesis horizontal debe cuidarse que el ánodo se coloque hacia el extremo del gel donde corren las muestras, de lo contrario las muestras se salen del gel. McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados.

4 CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS PARTE II. METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE Figura Preparación de un gel de agarosa. La agarosa es un polvo que para disolverse requiere calentarse hasta la ebullición del solvente. Una vez obtenido el líquido de agarosa, antes de que se enfrié a menos de 50°C se coloca en una cámara para formar el gel. El gel se coloca de manera que los pocillos queden en el extremo donde se localiza en polo negativo de la cámara de electroforesis, para permitir que la muestra corra a lo largo del gel. McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados.

5 CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS PARTE II. METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE Figura Electroforesis de ácidos nucleicos. Se representa un gel de agarosa en el cual se visualiza un marcador de peso molecular junto a las muestras para ayudar en la determinación del peso molecular de los fragmentos. La muestra se carga en los pocillos y se deja correr hacia el polo negativo. McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados.

6 CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS PARTE II. METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE Figura Perfil electroforético de un plásmido. Aunque la molécula de ADN (en este caso un plásmido) tenga la misma longitud en pb, puede demostrar diversos patrones de corrimiento electroforético según la conformación de la estructura. A) Plásmido superenrrollado. B) Plásmido circular. C) Plásmido linearizado. McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados.

7 CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS PARTE II. METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE Figura Electroforesis de proteínas. Las proteínas se corren en geles de acrilamida formados por dos fases. Una fase superior donde las moléculas se concentran y una inferior donde la muestra se separa en sus componentes según su peso molecular. Al estar pretratadas con SDS, las proteínas se rodean de cargas negativas, lo que les permite migrar hacia el polo positivo con independencia de su carga inicial. McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados.

8 CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS PARTE II. METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE Figura Marcadores de peso molecular para ADN. En la imagen el primer carril corresponde a las bandas que se obtienen de los fragmentos con un marcador como es el fago Phi X174 digerido por la enzima Hae III, mientras el segundo carril muestra los fragmentos de una escalera formada por segmentos sintéticos de ADN. McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados.

9 CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS PARTE II. METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE Figura Ejemplificación de electroforesis submarina. La muestra se coloca después de haber vertido el buffer de corrimiento y retirado el peine que sirve de molde para la formación de los pocillos. McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados.

10 CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS PARTE II. METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE Figura Electroforesis vertical. En esta cámara se aprecia cómo el gel de acrilamida ha quedado embebido en buffer de corrimiento en su extremo superior gracias a la colocación de amortiguador en la parte interna de la cámara. El buffer de la parte externa permite que el polo positivo cuente con la misma solución buffer que transmita la corriente a la parte inferior del gel. McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados.

11 CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS PARTE II. METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE Figura Movilidad de fragmentos de ADN. La imagen muestra fragmentos de ADN de mayor a menor tamaño (parte superior hacia parte inferior) visualizados con un agente intercalante. Se aprecia cómo la intensidad de la banda observada es variable, lo que indica groso modo cuál fragmento se encuentra en mayor cantidad y cuál en menor. McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados.

12 CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS PARTE II. METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE Figura Fuente de poder. La imagen muestra una típica fuente de poder donde se indica el miliamperaje a que está siendo corrida la muestra. La selección de las condiciones de corrimiento puede ser con un amperaje constante o bien a voltaje constante, como en este caso. McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados.

13 CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS PARTE II. METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE A B Figura Visualización de fragmentos de ADN. Estas fotografías son de un gel de agarosa donde la muestra fue visualizada por A) bromuro de etidio, y B) Syber®-Green. McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados.

14 CAPÍTULO 12. ELECTROFORESIS PARTE II. METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE Figura McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados.


Descargar ppt "PARTE II METODOLOGÍA DEL ADN RECOMBINANTE CAPÍTULO 12 ELECTROFORESIS McGraw-Hill Education LLC Todos los derechos reservados."

Presentaciones similares


Anuncios Google