Tinción Histológica Tutora: TM Solange Zapata

Presentación del tema: "Tinción Histológica Tutora: TM Solange Zapata"— Transcripción de la presentación:

1 Tinción Histológica Tutora: TM Solange Zapata
Universidad de Chile Facultad de Medicina Curso Histopatología 2007 Tinción Histológica Tutora: TM Solange Zapata Residente: Dr Jorge Chamorro Ruiz 3 de Mayo del 2007

2 Técnica Histológica Fijación Deshidratación Aclaramiento Inclusión
Corte Tinción Montaje Seminario Anterior

3 Tinción y Montaje Corte Desparafinado – Rehidratación Tinción
Deshidratación Montaje Cubreobjetos: funciones Protección del tejido ↓ refracción de luz polarizada

4 Colorantes ¿Por qué colorear una muestra?
Los diversos elementos de los tejidos poseen prácticamente el mismo índice de refracción, lo que hace que el reconocimiento de distintas estructuras sea una tarea difícil.

5 Definición de Colorante
Un colorante es un cuerpo coloreado que puede comunicar su color a otro cuerpo. La coloración es la propiedad que tienen ciertos cuerpos de ejercer una absorción selectiva sobre la luz. Dicho de otra manera un cuerpo se ve de tal color porque trasmite por transparencia o por difusión las radiaciones complementarias de las que él absorbe.

6 Tipos de Colorantes Colorantes que diferencian los componentes ácidos y básicos de la célula. Colorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz extracelular. Sales metálicas que se precipitan en los tejidos y forman depósitos de metales en ellos.

7 Tipos de Coloraciones Directas: se producen por inmersión en el baño colorante. Indirectas: en este tipo de coloración, el colorante no puede actuar directamente, el objeto a colorear debe ser tratado de antemano por otra sustancia que lo prepare para admitir el colorante, esta se llama mordiente.

8 Fundamentos Químicos de la Coloración
Clasificación colorantes según afinidad: Colorantes nucleares o básicos: su componente colorante activo es una base coloreada que se combina con los ácidos nucleicos. Colorantes citoplasmáticos o ácidos: su componente activo es un ácido coloreado que se combina con el citoplasma. Colorantes neutros, tanto el ácido como la base son coloreadas.

9 Colorantes básicos ANILINA+ Cl-
Los colorantes básicos reaccionan con los GRUPOS ANIÓNICOS de los componentes texturales, que son los grupos fosfato de los ácidos nucleicos (ADN y RNA), los grupos SULFATO de los glucosaminoglucanos y los GRUPOS CARBOXILO de las proteínas. La reacción de estos grupos varía según el pH.

10 Colorantes ácidos Na+ ANILINA-
Los colorantes ácidos se unen primariamente a los componentes texturales por medio de enlaces electrostáticos de manera similar pero opuesta a la de los colorantes básicos. Las anilinas ácidas reaccionan con grupos catiónicos, como los grupos amino ionizados de las proteínas.

11 Entonces: Elementos que se tiñan con colorantes básicos (ej. Hematoxilina) son basófilos: La Heterocromatina y los Nucleolos por los grupos Fosfato ionizados. Ergatoplasma por grupos Fosfato ionizados. Matriz del Cartílago por grupos Sulfato ionizados Elementos que se tiñan con colorantes ácidos (ej. Eosina) son acidófilos: La mayor parte del citoplasma no especializado. Filamentos Citoplasmáticos. Fibras extracelulares. Todos estos debidos a grupos Amino ionizados.

12 Metacromasia Fenómeno por el cual un colorante cambia de color tras reaccionar con un componente textural. Se debe a que en tejidos con altas concentraciones de POLIANIONES, la molécula del colorante se polimeriza entre si y sus propiedades de absorción son diferentes de las propiedades de las moléculas individuales. Cromótropos: Glucosaminoglucanos sulfatados, nucleoproteínas, cartílago, gránulos de los mastocitos. El cristal violeta también genera metacromasia al teñir amiloide Azul de Toluidina tiñe gránulos mastocito púrpura

13 Tinción (coloración) de cortes
Diferentes componentes celulares y tisulares poseen diferentes afinidades tintoriales.

14 Tinción (coloración) de cortes

15 Hematoxilina-Eosina Técnica de tinción más usada. Hematoxilina:
Colorante natural. Propiedades similares a las anilinas básicas. Tiñe todas las estructuras celulares, pero principalmente el núcleo (Histonas). Eosina: Colorante ácido. Acción es la de una anilina ácida. Tiñe ppalmente citoplasma celular.

16 Cortes de piel Tinción Hematoxilina-Eosina

17 Técnica de Tinción H/E Tinción con hematoxilina.
Lavado con abundante agua. Aplicar Borato de Potasio. Cambia el color generado por la hematoxilina del morado al azul. Aumenta el contraste de color.

18 Técnica Tinción H/E II Eosina Diferenciación: Azuleamiento:
Eliminación selectiva del exceso de colorante. Se obtiene pasando el corte por un baño de alcohol ácido. Resalta núcleos. Azuleamiento: La tinción queda de color rojizo se vira a azul intenso Sumerge la placa en agua corriente alcalina o carbonato de litio al 1% en agua. Eosina Obtenemos núcleos azules, citoplasma rosado y colágeno y fibras musculares rosado pálido.

19 Cubre-objeto Una vez teñido el tejido debe ser protegido con un cubre-objeto. Deshidratar Medio de montaje

20 Limpieza de láminas

21 Análisis de placas TÉCNICAS ESPECIALES DIAGNÓSTICO ±10% biopsias
80-90% bp

22 Tinciones Especiales

23 Tinciones para Amiloide
Rojo Congo (cortes ±30 mm) H/E

24 Tinciones para Amiloide
Birrefringencia

25 d FITE: bacilos ácido resistentes
Bacterias c c Gram negativo: colonias bacterianas se tiñen rojas a d b a y b Gram positivos: tinción azul d FITE: bacilos ácido resistentes se tiñen rojo

26 Bacterias II Ambas placas con tinción Ziehl Neelsen
Bacilos ácido resistentes se tiñen rojo brillante

27 Calcio Von Kossa-Azul Toluidina Von Kossa: depósitos de calcio
Se tiñen café oscuro-negro

28 Colágeno I: proteína extracelular, predominante en dermis, función estructural
b b e a a y b Picrosirius: Colágeno I color amarillo-rojizo e Van Gieson: colágeno I rojo d c c y d Tricromico Masson: colágeno I verde

29 Colágeno III: o fibras de Reticulina, en dermis perineural, perivascular
Impregnación con Nitrato de Plata: fibras de reticulina se tiñen negras

30 Eosinófilos Tinción Giemsa, eosinófilos se ven rojos

31 Fibras elásticas HE Orceína ácida de Pinkus/Giemsa:
fibras de coloración pardo oscura

32 Fibrina ambas, Tinción de Picro-Mallory: Fibrina se tiñe rojo claro
También PAS

33 Hemosiderina a Gránulos de Hemosiderina sin teñir, de colora
ción amarillo-café birrefringentes a b Ferrocianuro de Potasio de Perls: azul b

34 Hongos b b b PAS para Criptococo (rojo) a
a Mucicarmin para teñir Criptococo: hongos de coloración azul-violácea c Tinción de PAS evidenciando Blastomicosis c c

35 Hongos II c Tinción de Gomori para Criptococo c a
a PAS esporas fungicas b PAS Coccidiomicosis en ambas, hongos se tiñen rojos b

36 Lípidos sólo en tj fijado en formalina + cortes por congelación
b b Sudan III: adipocitos rojos a a Sudan IV: adipocitos anaranjados c c Sudan black b: Lípidos azul-negruzcos

37 Mastocitos ambas, Tinción con Azul de Toluidina:
gránulos de Mastocitos azul-púrpura (metacromasia)

38 Mastocitos ambas, Tinción de Giemsa, donde los gránulos de los
Mastocitos son teñidos púrpura

39 Melanina ambas, Tinción de Fontana Masson
pigmento melánico se tiñe negro

40 Principales colorantes

41 Tricrómico de Masson Principal Uso: Colágeno. Tiñe: Colágeno Verde.
Núcleo, músculo y nervios  Rojo oscuro. Citoplasma  amarillo

42 Van Gieson Principal Uso: Tejido Fibroso Tiñe: Colágeno  rojo.
Núcleo  azul negro Músculos, nervios  amarillos (+Verhoeff) fibras elásticas  negro

43 Fontana Masson Principal Uso: Melanina Tiñe: Melanina  Negro.

44 Plata Metenamina Principales Usos: Hongos y Cuerpos de Donovan Tiñe:
Paredes micóticas  Negros. Cuerpos de Donovan  negro

45 PAS Principales Usos: Glucógeno, MPS neutros y Hongos, Membrana basal.
Tiñe: Glucógeno  Diastasa lábil. MPS neutros y Paredes micóticas  Diastasa resistentes.

46 Reacción positiva para glucógeno y polisacáridos neutros.
Reacción positiva sólo para polisacáridos neutros. + DIASTASA

47 Azul alcián Principal Uso: Mucopolisacáridos ácidos Tiñe
Mucopolisacáridos ácidos (mucina) Azul.

48 Azul de toluidina Principal Uso: Mucopolisacáridos ácidos Tiñe
Mucopolisacáridos ácidos  Purpura metacrómico.

49 Giemsa Principales usos: Gránulos mastocitarios, MPS ácidos, eosinófilos, leishmanias, médula ósea Tiñe: Gránulos mastocitarios, Mucopolisacaridos ácidos  Púrpura. Eosinófilos, leishmanias  Rojo. Eosinófilos en mucosa gástrica

50 Ferrocianuro de Potasio de Perls.
Principal Uso: Hemosiderina Tiñe: Hemosiderina  Azul

51 Rojo Congo Principal Uso: Amiloide. Tiñe
Sustancia amiloide  Roja con luz, Verde con luz polarizada

52 Von Kossa Principal Uso: Calcio Tiñe: Calcio  Negro.

53 Naftol AS-D cloroacetato esterasa
Principal Uso: Mastocitos y Neutrófilos Tiñe: Gránulos de mastocitos y neutrófilos Rojo

54 Orceína ácida de Pinkus/Giemsa
Principal Uso: Fibras elásticas. Tiñe: Fibras elásticas  Pardo oscuro.

55 Histopatología es como la espada del augurio
hacen ver más allá de lo evidente