Histología (anatomía microscópica)

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1 Histología (anatomía microscópica)
Objetivo: Mediante el uso de técnicas microscópicas, comprender la micro-anatomía de células, tejidos y órganos, y correlacionar la estructura con su función. Técnicas de microscopía óptica más usadas: Combinación de colorantes basófilos y acidófilos (por ej., Hematoxilina-Eosina, Tricrómico de Mallory) Histoquímica (Fosfatasa ácida, PAS [ácido periódico-Schiff]) Inmuno-histoquímica (uso de Ac contra estructuras específicas, conjugados con moléculas fluorescentes [IFD e IFI] o con enzimas) Microscopía electrónica de transmisión (MET) y de barrido (MEB)

2 Hematoxilina-Eosina: Técnica de coloración
Fijación de la muestra con Formalina (solución acuosa tamponada de formaldehído). Detiene el metabolismo y conserva la estructura del tejido (proteínas pero no lípidos  mal fijador de membranas). Lavado y deshidratación (serie de soluciones alcohólicas de concentración creciente hasta el 100%). Extracción del alcohol con Xileno, luego inclusión de la muestra con parafina fundida (miscible en Xileno). Enfriamiento y endureci-miento de la parafina  Taco  cortes de 5-15  de espesor con micrótomo que se montan sobre portaobjetos. Coloración con Hematoxilina: extracción de la parafina con Xileno, re-hidratación del corte con soluciones alcohólicas de concentración decreciente, y tinción con solución acuosa de Hematoxilina. Coloración con Eosina: deshidratación del corte con soluciones alcohólicas de concentración creciente, y tinción con solución alcohólica de Eosina. Lavado con Xileno, agregado de un líquido de montaje no acuoso, y cobertura con un cubre-objetos para lograr un preparado permanente.

3 Hematoxilina-Eosina: Fundamento de la coloración
La Eosina es un colorante ácido (predomina densidad de carga negativa), por lo cual se asocia y colorea a estructuras catiónicas del citoplasma y matriz extracelular, tales como: filamentos citoplasmáticos (como los de células musculares); membranas intracelulares; y fibras extracelulares (por sus aminoácidos básicos ionizados). La Hematoxilina se asocia con mordientes para actuar como un colorante básico, por lo cual se asocia y colorea estructuras aniónicas (que posean fosfatos, sulfatos y/o carboxilos ionizados): Heterocromatina y nucléolos RNA ribosomal Matriz extracelular (por los sulfato de los GAG)

4 Ácido periódico-Schiff (PAS): Fundamento
El ácido periódico rompe la unión entre carbonos con hidroxilos adyacentes, y forma grupos aldehído. El reactivo de Schiff reacciona con los aldehídos para dar un color rojo púrpura intenso. La reacción de PAS tiñe carbohidratos, y se usa para detectar: Gránulos de glucógeno Moco en diversas células Membrana basal de los epitelios Fibras reticulares del tejido conjuntivo