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Objetivo: Conocer las técnicas básicas para el análisis microbiológico del suelo 1)Normas prácticas para el muestreo de suelo 2)Técnicas para el cultivo.

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1 Objetivo: Conocer las técnicas básicas para el análisis microbiológico del suelo 1)Normas prácticas para el muestreo de suelo 2)Técnicas para el cultivo de microorganismos 3)Técnicas de observación al microscopio 4)Métodos de aislamiento y conservación PRÁCTICO N° 1 Técnicas para el estudio de microorganismos del suelo

2 1)Diseño de muestreo: Cantidad de muestras: topografía y heterogeneidad del lote Forma de muestreo: cultivo, sistema de labranza Profundidad: 0 – 20 cm 2)Acondicionamiento de las muestras 3)Preparación de las muestras en laboratorio Normas prácticas para el muestreo de suelo

3 Cantidad de muestras: topografía y heterogeneidad del lote 15 Submuestras = 1 Muestra Loma Medialoma Bajo Imagen Satelital Mapa de RendimientoMapa de Ambientes Agricultura de Precisión

4 Elementos de muestreo Barreno HidráulicoPalaBarreno Manual

5 Forma de muestreo: cultivo y sistema de labranza Siembra directaLabranza convencional Rastrojo de maízRastrojo de soja Suelo laboreado

6 Forma de muestreo: profundidad 0 cm. 20 cm.

7 Acondicionamiento de las submuestras ~200 g.

8 Preparación de las muestras en laboratorio Oreado Tamizado Embolsado y Rotulado Conservación Mínimo 24 hs.

9 Requerimientos para el cultivo de microorganismos en laboratorio: 1)Condiciones de asepsia: esterilización 2)Medios de cultivos 3)Condiciones ambientales Técnicas para el cultivo de microorganismos

10 Condiciones de asepsia: esterilización Esterilización: eliminar todos los organismos vivos Métodos de esterilización: –Calor: húmedo y seco –Radiación –Filtración –Productos químicos

11 Calor húmedo: Autoclave A gas con regulación manual Eléctrica con regulación automática Combinación de calor, presión y humedad Para sustancias acuosas Temperatura de esterilización: 121°C - 20 minutos

12 Temperatura de esterilización: 160 °C Tiempo: 2 hs Calor seco: Horno de esterilización Para materiales estables al calor (vidrio, metal, porcelana etc.) Vista exterior Vista interior

13 Otros métodos de esterilización Filtración: soluciones lábiles Agua Oxigenada Alcohol etílico Hipoclorito Formol Bicloruro de mercurio Radiación UV: superficies, aire y agua Productos químicos: mesada, manos, tapones, etc. Filtro

14 Medios de cultivos Definición: mezcla balanceada de requerimientos nutritivos para el crecimiento de microorganismos Tipos: –Generales –Selectivos Composición química: fuente de carbono, fuente de nitrógeno, fuente de energía, base mineral y factores de crecimiento Características: líquidos o sólidos: agentes solidificantes

15 Composición de medios de cultivos FUENTECOMPUESTOCANTIDAD Fuente de C y energía Sucrosa20 g Base mineral Fosfato di potásico0.05 g Fosfato monopotásico 0.15 g Cloruro de calcio0.01 g Sulfato de magnesio 0.2 g Molibdato de sodio0.002 g Cloruro férrico0.01 g Carbonato de calcio 0.1 g AguaAgua destilada1000 ml pH = 7 FUENTECOMPUESTOCANTIDAD Fuente de C y energía Almidón12 g Fuente de NNO3 Na0.5 g Base mineral PO4 HK21.0 g SO4 Mg 7 H2O0.5 g Agente solidificante Agar15 g AguaAgua destilada1000 ml pH = 7 Medio selectivo: Fijadores de Nitrógeno Medio general

16 Preparación de medios de cultivo encender colocar recipiente para pesar tarar colocar el componente a pesar registrar la lectura Pesar componentes sólidos:

17 Disolver con agua destilada: hidratar componentes sólidos agregar agua disolver

18 Regular pH: pHmetro soluciones reguladoras encendido y lavadolectura lavado del electrodo protección del electrodo

19 Preparación de medio sólido agregar agar fundir al calor medio líquido medio agarizado

20 Fraccionar y acondicionar para esterilizar Fraccionamiento de medio líquido Fraccionamiento de medio sólido (en caliente ) Acondicionado para esterilizar

21 Esterilizar en autoclave Medios en Pico de flauta

22 Visualización de microorganismos: porta objeto enterrado Suelo en estudio Portaobjeto enterrado Riego Incubación

23 Cultivo de microorganismos del suelo en medio líquido Incubación Siembra Dilución

24 Muestreo de suelo Cantidad de muestras Composición Profundidad Tamaño del lote Topografía Una muestra n° submuestras 0-20 cm. con rastrojos Preparación de muestras en laboratorio Oreado Tamizado Envasado y RotuladoConservación en heladera Guardar en conservadora

25 Laboratorio Esterilización Autoclave - horno Radiación Filtración Productos químicos Medio de cultivoObservación Aislamiento Práctico 2 Composición química Base mineral Fuente de carbono Fuente de energía Agua Preparación de medios Líquidos Pesar drogas Disolver con agua destilada Regular pH Fraccionar Sólidos Pesar drogas Disolver con agua destilada Regular pH Agarizar Fundir Fraccionar Esterilización en autoclave Siembra de suelo Incubación Práctico 1

26 Actividades 1)Preparación de muestras de suelo en laboratorio: tamizar, embolsar y rotular. 2)Visualización de microorganismos de suelo: enterrar un portaobjeto. 3)Cultivo de microorganismos de suelo: colocar una alícuota de suelo en medios general y selectivo enterrar un portaobjeto. 4)Visita al Laboratorio de Microbiología Agrícola F.C.A


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