PROTEÍNAS DRA. BIÓRICA E. LAMAS.

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1 PROTEÍNAS DRA. BIÓRICA E. LAMAS

2 PROTEÍNAS proteis “primero en importancia”.
Macromoléculas compuestas de polímeros de aminoácidos unidos por enlaces covalentes, las cuales están involucradas en múltiples procesos celulares.

3 PROTEÍNAS

4 Características Generales
PROTEÍNAS Características Generales Constituyen 50-70% del peso seco de la célula. Se encuentran todas las células, fluidos secreciones y excreciones.

5 PROTEÍNAS Metabolismo 20 aminoácidos. 9 aminoácidos esenciales.
Degradación (pepsina y tripsina) → aminoácidos. Absorción → sistema porta Funciones y reserva Síntesis de proteínas y de productos nitrogenados no proteicos.

6 Estructura

7 UNIÓN PEPTÍDICA La condensación de dos o mas aminoácidos por medio de sus grupos –COO- y –NH3+ con pérdida de una molécula de agua.

8 Es el orden de los aminoácidos unidos entre sí por uniones peptídicas.
ESTRUCTURA PRIMARIA Es el orden de los aminoácidos unidos entre sí por uniones peptídicas.

9 α HELICE ESTRUCTURA SECUNDARIA Estable Estructura helicoidal
Varias vueltas semejan un cilíndro

10 ESTRUCTURA β ESTRUCTURA SECUNDARIA
Formada por dos o más cadena polipeptídicas paralelas o antiparalelas. Adosadas estrechamente por puentes de hidrógeno. Estructura laminar plegada.

11 ESTRUCTURA TERCIARIA Arreglo tridimensional de las proteínas.
Uniones de atracción electrostática. Puentes de hidrógeno. Interacción de cadenas no polares. Fuerzas de Van der Waals. Puentes disulfuro Mioglobina.

12 ESTRUCTURA CUATERNARIA
Agrupación de varias cadenas polipeptídicas iguales o diferentes para formar estructuras más complejas.

13 ESTRUCTURA QUINARIA Estructuras supramoleculares
Asociación de las proteínas a otras moléculas

14 PROTEÍNAS Función Ejemplo
Transporte de moléculas pequeñas Transcortina (cortisol), tiroxina (GFT) Receptores Receptores de estriol (citoplasmático), receptor de insulina (superficie) Catalíticas Todas las enzimas Estructurales Colágeno Nutricionales (fuente de calorías Albúmina y aminoácidos) Presión oncótica Albúmina Defensa del huésped frente a Anticuerpos (todas las clases) antígenos externos Hormonas Hormona estimulante de tiroides (TSH) Coagulación Fibrinógeno

15 DETECCIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES
MÉTODO PRINCIPIO COMENTARIO Kjeldahl Digestión de proteínas; medición del contenido de nitrógeno Método de referencia; asumir el contenido medio de nitrógeno de 16 %. Refractometría Medición del índice de refracción debido a los solutos en el suero. Rápido y sencillo; el índice refractivo es definido como la relación de la velocidad de la luz en el aire con la velocidad de la luz en el medio medido. Biuret Formación de color violeta a la quelación entre iones de cobre y porción peptídica Método de rutina, requiere al menos 2 uniones peptídicas y un medio alcalino, nm. Colorante unido a proteína Proteínas unidas a colorantes provocando cambio espectral de la absorbancia máxima de 465nm a 595nm la absorbancia se incrementa a 595nm. Turbidimetría Precipitación de proteínas y medición de turbidéz por el incremento de la densidad óptica. Comparación con patrones tratado de manera similar. Lowey Método de Biuret modificado Reactivo de fenol que mejora el color

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17 TÉCNICAS DE SEPARACIÓN
Electroforesis

18 Proteínas separadas en bandas después de tinción
Electroforesis en solución amortiguadora Aplicación de muestra en gel de agarosa Proteínas separadas en bandas después de tinción

19 PATRÓN NORMAL

20 PATRÓN NORMAL Albumin 1 2   + -

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23 PATRONES DE ANORMALIDADES
Patrón normal Patrón nefrótico

24 PATRONES DE ANORMALIDADES
Patrón normal Patrón cirrótico

25 PATRONES DE ANORMALIDADES
Patrón normal Gamapatía Monoclonal

26 Precipitación Separan la albúmina y las globulinas. Sulfato sódico. Sulfito sódico. Sulfato amoniaco. Metanol. Valorar PT y obtenemos la proporción albúmina/globulina.

27 Separación en columna Según la matriz escogida, las proteínas se pueden separar de acuerdo a su carga, su hidrofobicidad, su tamañó o su capacidad de unirse a grupos químicos particulares.

28 Diferentes tipos de cromatografía en columna

29 CASO CLÍNICO Paciente masculino de 45 años esta siendo sometido a evaluación por una posible recurrencia de plasmocitoma, que originalmente se presentó como una fractura en la columna vertebral, manifestada por compresión. Ha sido tratado con radiación y quimioterapia. La electroforesis de proteínas muestra a la albúmina, α1, α2 y β en proprociones normales . La fracción γ demuestra una ligera banda monoclonal en la primera porción (cerca de la región β). La electroforesis de orina concentrada muestra un sola banda monoclonal que migra un poco menos que la banda observada en el suero.

30 La presencia de la banda monoclonal en el suero indica recurrencia del tumor?
Qué dato adicional le interesa conocer acerca de la determinación en orina? Qué otras pruebas se necesitan para confirmar el tipo de proteínas urinarias?

31 BIBLIOGRAFÍA Henry, el Laboratorio en el diagnóstico clínico, 20ª edición., editorial Saunders, U.S.A Bishop M, Clinical Chemistry, 4ª edición, editorial Lippincott Williams Wilkins, U.S.A Kaplan, química clínica, 3ª edición, Editorial Mosby, New York 1996. Wallach J, Interpretación clínica de las pruebas de laboratorio, 4ª edición, editorial Masson, España 2002.