Análisis de la expresión de marcadores moleculares en adenopatías mediastínicas de pacientes con Cáncer de Pulmón no microcítico con resección completa:

Presentación del tema: "Análisis de la expresión de marcadores moleculares en adenopatías mediastínicas de pacientes con Cáncer de Pulmón no microcítico con resección completa:"— Transcripción de la presentación:

1 Análisis de la expresión de marcadores moleculares en adenopatías mediastínicas de pacientes con Cáncer de Pulmón no microcítico con resección completa: una aproximación a la estadificación molecular S. Benlloch (1), JM Galbis (2)*, A.Teruel (3), S.Bolufer (2), José Ponce (4), I.Aranda (3), J. Cerezal (2), R. Rosell (4)**, M. Tarón (1), B.Massutí (4). Unidad Investigación (1), Cirugía Torácica (2), Anatomía Patológica (3), Oncología Médica (4), Hospital General Universitario de Alicante, Alicante, *Hospital de la Ribera, Alzira, **Institut Català d´Oncologia, Badalona

2 Fundamentos La supervivencia a 5 años del Cáncer de Pulmón no Microcítico con resección quirúrgica completa se sitúa entre 60-70% Cuando existe afectación neoplásica ganglionar la supervivencia es inferior al 50% La extensión ganglionar es el principal factor clínico predictivo para recidiva y pronóstico para peor supervivencia

3 Antecedentes Los estudios histopatológicos actuales muestran limitaciones en la estadificación ganglionar: Análisis sistematizado exhaustivo Técnicas inmunohistoquímicas El incremento de sensibilidad en la detección de la extensión ganglionar de las neoplasias broncopulmonares podrían suponer un avance: Selección de pacientes de alto riesgo Proceso de indicación de tratamiento quimioterápico postoperatoria

4 Objetivos Valorar la factibilidad de detectar células neoplásicas en las adenopatías regionales mediante una aproximación de análisis molecular Evaluar diversos biomarcadores potenciales Correlacionar los hallazgos con los estudios histopatológicos e inmunohistoquímicos Analizar su potencial impacto pronóstico en el curso evolutivo de los pacientes

5 Métodos Pacientes elegibles: pacientes con Cáncer de Pulmón no Microcítico con resección R0 y Estadio I patológico (cirugía con linfadenectomía mediastínica sistemática) Las piezas quirúrgicas (pulmón y adenopatías) fueron evaluadas de manera protocolizada por anatómo-patólogo realizándose una disección ganglionar sistemática Se recogieron muestras pareadas de tumor y de cada uno de los ganglios linfáticos y se dividieron en 2 portas (fijación y bloque parafina / congelación a 80º C)

6 Métodos/2 Estudio histopatológico protocolizado: clasificación, grado histológico, estadificación patológica. Se examinaron un mínimo de 3 secciones no consecutivas con tinción HE en cada ganglio linfático Análisis IHQ para CK7 (Clone COU-TL12/30, Dako, 1:50) Identificación y validación de potenciales marcadores moleculares: SAGE (

7 SAGE Anatomic Viewer. Ejemplo expresión diferencial PLUNC

8 Métodos/3 Anális de la expresión de mRNA de 13 genes: CEACAM5, CDX1, CK19, CK20, EVA1, Efrina A1, Mesotelina, MGB2, MAGE A10, PLUNC, SFTPC, E-Cadherin, TACSTD2 RT-Q-PCR usando ABIPRISM 7500 Extracción RNA mediante ABIPRISM 6100 Specific designed Primers y sondas diseñadas específicamente (Applied Biosystems assay-on-demand) Todas las determinaciones se realizaron por triplicado GADPH como control

9 GAPDH CEA, PLUNC CEA, PLUNC CEA, PLUNC

10 Pacientes 38 pacientes consecutivos con CPCNP con resección completa y estadio patoológico I Mediana seguimiento 24 meses (9-46 m) 11 p fallecen por CPCNP y 1 p fallecido sin recidiva 28 hombres / 10 mujeres Mediana edad 66 a (44-79) Subtipos histológicos: 12 adenoca / 16 epidermoides / 10 indif. célula grande Tipo cirugía: 34 lobectomía 4 neumonectomía

11 Resultados Entre los genes estudiados CEA and PLUNC mostraron alta expresión in tejido pulmonar y baja o nula expresión en ganglios linfáticos normales Se consideran adenopatías con positividad molecular aquellas en las que la expresión de CEA o PLUNC se detectó por triplicado en la RT-Q-PCR 96

12 Resultados/2 344 muestras ganglionares con negatividad histopatológica (pN0) 44/344 + para CEA (13%) 54/344 + para PLUNC (16%) Patrón de expresión similar para ambos marcadores 24/38 pacientes (63%) mol + N1 8/38 pacientes (21%) mol + N2

13 Resultados/3: Parámetros clínico-moleculares
Mol Negat N2 Mol Posit N2 p Sexo Hombre Mujer 23 (79%) 7 (78%) 6 (21%) 2 (22%) 0.99 Tamaño T <3 cm >3 cm 16 (89%) 14(70%) 2 (11%) 6 (30%) 0.24 Estadio IA IB 8 (90%) 31 (75%) 1 (10%) 7 (25%) 0.65 Localización tumor LSD LSI LID+LMD LII 10 (91%) 12 (86%) 3 (37%) 4 (100%) 1 (9%) 2 (14%) 5 (63%) 0.02

14 Resultados/4: Parámetros clínico-moleculares
Mol Negat N2 Mol Posit N2 p Infiltración pleural Sí No 16 (80%) 14 (78%) 4 (20%) 4 (22%) 0.99 Histología Epidermoide Adenoca Célula Grande 11 (79%) 8 (80%) 3 (21%) 2 (20%) Adenop. Mol N1 Negat Posit 14 (100%) 16 (67%) 8 (33%) 0.02

15 Resultados/5: Adenopatias Mediastinicas Mol Positivas y evolución
Mol Negat p Mediana SLE (meses) 15 +/ m NR 0.028 Mediana Superv. 17.3 +/- 5.7 0.0083

16 Resultados/6: análisis multivariante para SLE
HR (95% C.I.) p Mol N2 status Negativo Positivo 30 8 1 Ref 2.54 ( ) 0.16 Tamaño T < 3 cm > 3 cm 18 20 4.29 ( ) 0.09 Infiltración pleural Sí No 4.02 ( ) Ref 1 0.12 Histología Epidermoide Adenoca Cél. Grande 14 10 4.11 ( ) 4.59 ( ) 0.07 Sexo Hombre Mujer 29 9 2.07 ( ) 0.48 Edad 38 1.04 ( ) 0.33

17 Resultados/7: análisis multivariante superv.
HR (95% C.I.) p Mol N2 status Negativo Positivo 30 8 1 Ref 6.14 ( ) 0.01 Tamaño T < 3 cm > 3 cm 18 20 5.18 ( ) 0.12 Infiltración pleural Sí No 8.63 ( ) Ref 1 0.05 Histología Epidermoide Adenoca Cel. Grande 14 10 7.70 ( ) 9.59 ( ) 0.08 0.02 Sexo Hombre Mujer 29 9 2.63( ) 0.40 Edad 38 1.08 ( ) 0.06

18 Conclusiones La expresión de mRNA de CEA y PLUNC podría ser utilizada como marcador molecular de micrometástasis ocultas en los ganglios linfáticos de los pacientes con CPCNP 63% de los pacientes pN0 podrían ser clasificados como N1 molecular 21% de los pacientes pN0 podrían ser clasificados como N2 molecular La expresion de mRNA de CEA y PLUNC en las adenopatías mediastínicas muestra un impacto pronóstico en la supervivencia de los pacientes resecados en Estadio I La expresión de CEA y PLUNC puede ser una herramienta de selección para pacientes en Estadio I con alto riesgo y podría ser útil en la indicación de tratamiento quimioterápico adyuvante en este subgrupo de pacientes

19 Agradecimientos A Susana Benlloch
A María Sánchez-Ronco por el análisis estadístico Al personal de enfermería y auxiliar de quirófano A los técnicos de laboratorio A las data managers Financiación: Convocatoria 2006 Dirección General de Ordenación, Evaluación e Investigación Sanitaria de la Generalitat Valenciana