Diagnostico Bacteriológico de la Tuberculosis: CULTIVO Salta, Noviembre 2015

CULTIVO Método de referencia por su precisión y especificidad para confirmar el diagnostico. Complementa a la baciloscopía

 15 – 20% todos los casos de TB APORTE  20 – 30% casos de TB pulmonar  variable para TB extrapulmonar

VENTAJAS Permite dar seguridad al resultados de BK +: hisopados, BAL. Permite identificar especie por métodos bioquímicos. Importante en pacientes inmunodeprimidos : DESCARTAR MICOBACTERIOSIS Alta sensibilidad: 100% en muestras pulmonares (10 – 100 BAAR/muestra). Detecta BAAR viables  mejor método para demostrar curación del paciente al finalizar tratamiento. Permite realizar Prueba de Sensibilidad a drogas Es el Método de Referencia para evaluar todo nuevo método diagnostico

BAAR se multiplican cada 24 – 48 hs Gérmenes comunes cada 15 – 60 min DESVENTAJAS Sensibilidad variable en TB EP. Tiempo: 20 – 60 días (en medios sólidos). BAAR se multiplican cada 24 – 48 hs Gérmenes comunes cada 15 – 60 min

Persistencia del bacilo en las muestras: El tiempo es crítico en muestras con escasos BAAR y con PH acido (orinas, LG). Esputos: hay reproducción de flora contaminante que puede desnaturalizar la muestra. Sin embargo , en muestras con alto contenido de BAAR se han obtenido Cultivos (+ ) en muestras de 15 días de recogida (HELADERA) LUZ SOLAR CALOR (> 40ªC) DESECACION RESISTE A BAJAS TEMPERATURAS

USO SELECTIVO DEL CULTIVO ???

PARA DIAGNOSTICO

BK negativa de 3 muestras respiratorias   BK negativa de 3 muestras respiratorias Extrapulmonares (orina, líquidos de punción, sangre,biopsias, pus de cavidades abiertas) Muestras de niños Inmunosuprimidos, particularmente HIV y diabéticos. BK + en lavado gástrico, BAL, hisopados

Pacientes con antecedentes de tratamiento antituberculosos previo, especialmente si se registro abandono o fracaso. Contactos de casos con tuberculosis resistente Internados o trabajadores de instituciones de salud o comunidades cerradas donde se registran casos con TB – MR.

PARA CONTROL DE TRATAMIENTO

Pacientes con BK + en el control del 2º mes de tratamiento o en un control posterior (4º y 6º). Casos diagnosticados con BK + y que convierten a BK + durante el tratamiento

METODOS…. MGIT 960 Método de Petroff. Nuestro objetivo… Contamos con… MGIT 960 Se pueden sembrar todas las muestras, excepto sangre. Resultados tardan entre 4 y 13 días. Prueba sensibilidad a SIRE Método de Petroff. Método de Kudoh.

MÉTODO KUDOH OGAWA 1. Adherir a un hisopo estéril las partículas útiles del esputo.

NaOH 4 %  DECONTAMINACIÓN MÉTODO KUDOH OGAWA 2. Sumergir en un tubo con 3 ml de NaOH 4% durante 2 minutos 2 min NaOH 4 %  DECONTAMINACIÓN

Máximo: 5 muestras MÉTODO KUDOH OGAWA 3. Frotar el hisopo sobre la superficie de 2 tubos por muestra Máximo: 5 muestras MUESTRAS BAAR POSITIVO PROCESAR ULTIMO (CONTAMINACION CRUZADA)

Tapar con algodón. Quemar tapón. Colocar tapa de goma. INCUBAR 37º C MÉTODO KUDOH OGAWA Tapar con algodón. Quemar tapón. Colocar tapa de goma. INCUBAR 37º C 4. PROCESAR LAS MUESTRAS SIN DEMORA, EN EL MISMO DIA. CASO CONTRARIO REFRIGERAR

MÉTODO KUDOH OGAWA 5. LECTURA: 20, 30 y 60 dias

REGISTRO DE RESULTADOS SI SE OBSERVA CONTAMINADO Todos los tubos contaminados NEGATIVO Sin desarrollo luego de la lectura a las 8 semanas de incubación Nº EXACTO DE COLONIAS Entre 1 y 19 colonias en el total de medios sembrados POSITIVO + 20 a 100 colonias POSITIVO ++ Mas de 100 colonias (separadas) POSITIVO +++ Mas de 100 colonias (confluentes)

MÉTODO KUDOH OGAWA Ventajas Económico: no requiere Asparagina (Glutamato) Procedimiento de decontaminación y sembrado simple: NO REQUIERE CENTRIFUGACION No requiere equipamiento ni personal especializado Adecuado para laboratorios con poca infraestructura La muestra sembrada puede ser enviada a grandes distancias (refrigerada) Mayor cobertura al diagnostico

MÉTODO KUDOH OGAWA Desventajas Sensibilidad: 96 % Porcentaje de contaminación: 10% No se aplica a muestras EP

CULTIVO EN LA RED DE LABORATORIOS Mayor dedicación del personal por cada muestra Entrenamiento en prácticas de mayor riesgo Equipos de mediano y alto costo Laboratorio espacioso, con direccionamiento y purificación de aire

RIESGO EN EL LABORATORIO DE TUBERCULOSIS BAJO RIESGO Tareas administrativas Preparación y almacenamiento de materiales, reactivos MEDIO Ingreso de muestras Microscopia ALTO Procesamiento de muestras: BK, cultivo y PS Esterilización de material potencialmente infeccioso

Niveles de riesgo asociados con las actividades realizadas en el laboratorio Cultivo en Kudoh (Petroff)

BACILOSCOPIA CULTIVO: KUDOH CULTIVO: PETROFF Material viscoso, poca producción de aerosoles. Carga bacilar: baja 103 – 106 BAAR/ml Riesgo relativo de contraer TBC:1.4 (Población general:1.0) Alta generación de aerosoles Carga bacilar: alta Mas de108 BAAR/ml Riesgo relativo de contraer TB:7.8 Prueba de sensibilidad: 22

LABORATORIOS DE ALTO RIESGO NIVEL III Manipulación de cultivos para: identificación pruebas de sensibilidad Alta carga bacilar (mas de 5 cultivos + al mes) El riesgo es máximo cuando se abren tubos donde ha desarrollado M. tuberculosis debido a la cantidad de gérmenes que contienen NUESTRO PROMEDIO: 20

DEBEN SER REALIZADAS EN LA CSB 1. Barrera de protección primaria Cabinas de seguridad biológica (CSB) PROTECCION: operador, producto y medio ambiente. Buenas prácticas de laboratorio CLASE II A2 EL PROCESAMIENTO Y DIGESTIÓN DEL ESPUTO Y LAS MANIPULACION DE LAS MUESTRAS DEBEN SER REALIZADAS EN LA CSB

2. Barrera de protección SECUNDARIA: proteccion del medio ambiente UNIDIRECCIONALIDAD DEL FLUJO DE AIRE 6-12 CAMBIOS DEL VOLUMEN DE AIRE/HORA RECEPCION DE MUESTRA ANTESALA SECTOR CSB DUCTOS DE SALIDA DE CSB, PARA LOGRAR PRESION NEGATIVA

Decontaminación y eliminación de residuos MATERIAL CONTAMINADO AL SECTOR AUTOCLAVES

3. MINIMIZAR LA GENERACIÓN DE AEROSOLES: a. Centrífuga Centrífuga(s) de seguridad biológica (portatubos con tapa y desmontables) Preferentemente refrigerada Los portatubos son cargados y descargados dentro de la CBS b. Incinerador de ansas

4. Decontaminación y eliminación de residuos Autoclave:  material limpio: 30 minutos a 121ºC, 1 atm  material sucio: 1 hora a 121ºC, 1 atm Estufa de esterilización: 2 horas 170 ºC (material de vidrio limpio)

En caso de no contar con autoclave u olla: Olla a presión :  1 hora En caso de no contar con autoclave u olla: Lavandina al 1% :  al resto de las muestras, se tapa y se deja hasta el día siguiente para eliminarlo luego como desecho patógeno

5. USO DE DESINFECTANTES: FENOL 5 %   LAVANDINA 1% TIEMPO MINIMO DE CONTACTO 30 MIN Para muestras y todo lo que haya estado en contacto con ellas (aplicadores y derrames) (1 + 4 ) Para desinfección de superficies: mesadas LAVANDINA 0.1% Desinfección de pisos

EN RESUMEN Prácticas Equipamiento El riesgo de infectarse con M. tuberculosis en Laboratorios de Alto Riesgo puede minimizarse mediante la adopción de medidas de seguridad que afectan: Prácticas Equipamiento Diseños de laboratorios (adecuados al riesgo) Vigilancia de salud Entrenamiento

CARGAR DERIVADOS POR SIVILA

AÑO 2013: 4.402 estudios realizados PRESTACIONES A OTROS SERVICIOS (centros de salud, otros hospitales, interior, clínicas privadas, UNILAB, etc): AÑO 2013: 4.402 estudios realizados AÑO 2014: 4.326 estudios realizados CARGAS EN SIVILA AÑO Cargados por HSM-Laboratorio de TB Cargados por otros nodos como “derivados” 2013 232 2014 202 5