CONTAMINACION MICROBIANA DE AGUA PARA HEMODIALISIS RELEVAMIENTO PERIODO 7/02 - 06/05 LABORATORIO BELTRAN - ZUNINO

Evaluación de calidad microbiológica de agua para hemodiálisis - Número de centros evaluados: 31 - Número total de muestras: 4.107 - Período de estudio: 1/7/02 - 30/6/05

Requisitos microbiológicos/ metodología

Requisitos microbiológicos/ metodología

Requisitos microbiológicos/ metodología

Análisis microbiológicos  Análisis microbiológicos - Recuento de heterotróficos/ml - Búsqueda de Pseudomonas fluorescens, putida y aeruginosa / 10 ml - Recuento de coliformes totales /100 ml - Búsquedas eventuales de microorganismos específicos  Análisis biológicos - Endotoxinas bacterianas

Metodología de Referencia : Análisis microbiológicos: Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, American Public Health Association, (APHA), 20 Ed. Alcance y aplicación: métodos destinados al análisis de agua pertenecientes a un amplio rango de calidad: agua potable, industrial, superficie, etc. Métodos tomados como referencia por la USP para el análisis para uso farmacéutico. Endotoxinas bacterianas: US Pharmacopeia 27 - 2004

Toma de muestra Técnica Aséptica Abrir llave descartar (según flujo) Recoger la muestra (120 ml) Técnica Aséptica Quemar o sanitizar pico Refrigerar/ transportar Analizar (máx. 24 hs) Descartar aprox. 200 ml

Recuento de Heterotróficos Referencia: Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, A.P.H.A., 20 Ed., 9215 C. Muestra 0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml Condiciones de Incubación: 72 horas a 35 +/- 1 º C Examen de colonias con lente magnificador Medio de cultivo: Plate Count Agar

Búsqueda de Pseudomonas aeruginosa Referencia: Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, A.P.H.A., 20 Ed., 9213 F. Muestra Caldo asparagina doble concentración 48 horas a 35 º Luz UV Examinar fluorescencia (si hay dudas dejar 24 hs a t. Amb.) Confirmar P. aeruginosa + 10 ml

Recuento de coliformes totales Referencia: Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, A.P.H.A., 20 Ed. , 9222 B. 100 ml Filtrar membrana 0,45 micras + Confirmar C. totales Muestra Incubar 24 hs a 35 +/- 1 ºC Transferir a m-Endo

Coliformes totales en m - Endo Coliformes totales en Lauril Triptosa P. aeruginosa en caldo asparagina al UV (258 nm)

Biofilm luego de un tratamiento desinfectante

Determinación de endotoxinas bacterianas Principios biológicos: En presencia de endotoxinas bacterianas, el reactivo preparado por lisado enzimático de amebocitos lavados del cangrejo Limulus polifemus produce una reacción de coagulación en cascada con la formación de un coágulo de naturaleza proteica

1. Confirmación de sensibilidad de reactivo LAL () 2 3 4 ½  2  ¼  Control - agua apírógena + LAL  = 0.125 UE/ml Criterio aceptación:  obtenida entre ½ y 2 del valor declarado

2. Determinación de endotoxinas en muestra problema Controles + Control - - Ensayo por duplicado utilizando una dilución de la muestra, control positivo de endotoxina, verificación de ausencia de efecto inhibidor de la muestra problema y control negativo - Informe: menor (<) o mayor o igual (>=)que el límite de detección definido (2 UE/ml)

Condiciones ambientales Confiabilidad de los resultados Equipos - autoclaves - estufas - filtros Medios reactivos/ materiales Sistema de gestión de calidad Método Confiabilidad Condiciones ambientales Muestreador/ Analista

RESULTADOS ANALITICOS 1º Julio 2002 - 30 Junio 2005

% Heterotróficos < 200 ufc/ml según punto de muestreo Período 7/02 - 6/05 C Ab O Pt Ps Sl Rc Pretratamiento: 75,1 % Agua tratada: 93,2% Nº Muestras = 4107 Nº Centros = 31

% Heterotróficos - Circuito agua tratada Comparación de trieños 97-00 / 02-05 Nº muestras = 1384/2923 Nº centros = 31 / 31

% Heterotróficos < 200 ufc/ml Pico de Sala % Heterotróficos < 200 ufc/ml Evolución anual Nº muestras = 1.917 Nº centros = 29

% Heterotróficos según centro de diálisis Agua tratada % Heterotróficos según centro de diálisis Enero 2004 - Junio 2005 Centro Nº Nº Muestras = 617 Nº Centros = 23

% Heterotróficos según centro de diálisis Agua tratada % Heterotróficos según centro de diálisis Julio 1997 - Junio 2000 Centro Nº Nº Muestras = 885 Nº Centros = 21

% Heterotróficos - Cultivo de baño Julio 2002 - Junio 2005 Nº muestras baño = 171 Nº centros = 9

% P.aeruginosa, fluorescens y putida (+) según punto de muestreo 7/02-6/05 Nº muestras = 3.932 Total (+) = 2,5 % (sin Bñ) Nº centros = 30 Nº centros implicados = 16 centros Ose C Ab O Ps Sl R Baño

% P. aeruginosa (+) - Evolución 7/97 - 6/00 7/02-6/05 C Ab O Ps Baño C Ab O Ps Baño

% P. aeruginosa , flourescens, putida (+) según punto de muestreo 7/02 - 12/04 1/05 - 6/05 % Nº centros implicados año 2005: 13 centros Nº muestras 2005 = 1.231 Total (+) 2005 = 5,4% Ose C Ab O PS Ose C Ab O PS

% Coliformes (+) según punto de muestreo 7/02-6/05 Nº centros implicados: 12 centros Nº muestras = 3.645 Total (+) = 0,8 % Ose C Ab O Ps Sl Rc

% Coliformes (+) según punto de muestreo 7/97 - 6/00 7/02-6/05 Nº centros implicados: 12 centros C Ab O Ps Sl Ose C Ab O Ps Sl

% Coliformes (+) según punto de muestreo 7/02 - 12/04 1/05-6/05 Nº centros implicados año 2005: 9 centros Ose C Ab O Ps Sl Ose C Ab O Ps Sl Nº muestras 2005 = 1.159 Total (+) 2005 = 1,2%

Endotoxinas bacterianas Nº Muestras: 13 Nº Centros: 5 Resultados positivos: 0 Límites de detección: 5 y 2 UE/ml

CONCLUSIONES Mejora sistemática del nivel de heterotróficos en el agua tratada: 93,2% muestras aceptables Problemas de Pseudomonas y Coliformes en el año 2005 en diversos centros Problemas de Pseudomonas y Coliformes en el año 2005 en el agua de entrada No se ha extendido el control de endotoxinas bacterianas