ALVARO TRESIERRA AYALA CIRNA LA FLORA AMAZÓNICA: UNA HERRAMIENTA PROMISORIA PARA COMBATIR BACTERIAS OPORTUNISTAS DROGORRESISTENTES ALVARO TRESIERRA AYALA atresierraayala@hotmail.com

OBJETIVO Determinar la actividad antibacteriana in vitro de extractos etanólicos de la corteza de plantas amazónicas frente a cepas drogorresistentes

OBJETIVO Determinar la actividad antibacteriana in vitro de extractos etanólicos de la corteza de plantas amazónicas frente a cepas drogorresistentes ¿Fuente?

Determinar la prevalencia de Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa en teclados y ratones de computadoras del Hospital Iquitos “César Garayar García”

HISOPADO SOBRE SUPERFICIES TÉCNICA DEL HISOPADO SOBRE SUPERFICIES

Caldo Tripticasa de Soya (10 ml) Incubar a 37 ˚C por 24 h Agar Cetrimide Incubar a 37 ˚C x 24 h Caldo Tripticasa de Soya (10 ml) Incubar a 37 ˚C por 24 h Caldo Peptonado con 0.02% Cristal Violeta (10 ml) Agar Baird Parker Caldo Salado (10 ml) Incubar a 37 ˚C por 24 h

Staphylococcus aureus Prueba: CATALASA (+) Coloración Gram: Gram (+) Prueba: COAGULASA (+)

Pseudomonas aeruginosa Prueba: OXIDASA (+) Coloración Gram: Gram (-) Pruebas: OX/FER GLUCOSA (+) PRODUCCIÓN INDOL (-) CRECIMIENTO 42˚ C (+)

Tabla 1: Porcentaje de computadoras analizadas contaminadas o no por las especies bacterianas en estudio Tipo de computadora N° % Contaminada 26 37.6 No contaminada 43 62.4 TOTAL 69 100.0

Bacteria en estudio Cepas aisladas S. aureus P. aeruginosa TOTAL Presencia de especies bacterianas en estudio en las computadoras contaminadas del Hospital Iquitos “Cesar Garayar García”  Bacteria en estudio Cepas aisladas N° % S. aureus 16 + 6* 68.7 P. aeruginosa 4 + 6* 31.3 TOTAL 32 100.0 * Seis computadoras presentaron contaminación doble

Método de difusión en agar Mueller-Hinton, según Kirby-Bauer Determinar los perfiles de resistencia antibiótica de las cepas bacterianas Método de difusión en agar Mueller-Hinton, según Kirby-Bauer (citado por Panghal et al.,2011)

Porcentaje de resistencia y determinación de drogorresistencia en las diez cepas de Pseudomonas aeruginosa aisladas del hardware de computadoras Familia Antibiótico Antibiótico Cepa de P. aeruginosa % de Resist 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 CEFALOSPORINA Ceftazidima S R 40 CARBAPENEMS Imipenem 90 Meropenem MONOBACTAMS Aztreonam AMINOGLUCÓSIDOS Gentamicina 20 Amikacina QUINOLONAS Norfloxacina 60 Drogorresistencia +

Análisis de los resistotipos en las diez cepas de P. aeruginosa Cepa de P. aeruginosa 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 SRRRRRR X SRRRSSR SSSRSSR SRRRSSS SRRSSSR RRRRSSR RRRRSSS RRRRRRR

Cepa de Staphylococcus aureus Porcentaje de resistencia y determinación de drogorresistencia en las veintidos cepas de Staphylococcus aureus aisladas del hardware de computadoras. Familia antibió-tico Nom-bre anti-biótico Cepa de Staphylococcus aureus % Re-sist 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 PENICILI-NAS Penici-lina R S 95 Oxaci- lina GLICOPÉP-TIDOS Vanco-micina AMINOGLU CÓSIDOS Genta-micina FLUORO-QUINOLO-NAS Norflo-xacina 27 Ciprofloxacina TETRACI- CLINAS Tetraci-clina 32 MACRÓLI-DOS Eritro-micina 45 Drogorre-sistencia - +

Análisis de los resistotipos en las veintidos cepas de S.aureus. Cepa de S. aureus 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 RSSSSSSS x RSSSSSRR RSSRRSRS RSRSSSSS RSSRSSRS RSSSSSRS RSSSSSSR RSSSRSRR RSSSRSSR SSSSRSSS

Evaluar la susceptibilidad de las cepas bacterianas drogorresistentes frente a extractos vegetales.

Plantas amazónicas evaluadas Cedrela odorata Alchornea triplinervia Plantas amazónicas evaluadas Alchornea triplinervia “escobo” Annona muricata “guanábana” Averrhoa carambola “carambola” Brunfelsia grandiflora “chiric sanango” Caraipa grandifolia “aceite caspi” Cedrela odorata “cedro” Tabernaemontana heterophylla T. macrocalix T. markgrafiana T. maxima Averrhoa carambola Annona muricata Tabernaemontana maxima Brunfelsia grandiflora

Extractos etanólicos de cortezas Proporcionados por el Laboratorio de Investigación de Productos Naturales Antiparasitarios de la Amazonía (LIPNAA). SECADO MOLIENDA MACERACIÓN CONCENTRACIÓN FILTRACIÓN EXTRACTOS

EVALUACION DE LA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA 15 µl de la solución stock de cada extracto Solución stock del extracto 1g /ml

Método de difusión en agar Mueller-Hinton, según Kirby-Bauer Evaluar la actividad antibacteriana de los extractos vegetales sobre las cepas bacterianas Método de difusión en agar Mueller-Hinton, según Kirby-Bauer (citado por Panghal et al.,2011)

Actividad de los extractos vegetales frente a las cepas de Pseudomonas aeruginosa Extracto de planta Datos descriptivos de los halos de inhibición de los extractos contra P. aeruginosa (mm) Promedio DS Mediana Valor Máximo Mínimo Alchornea triplinervia 12.6 3.55 12.25 18.5 8 Brunfelsia grandiflora 8.55 1.66 12 7 Caraipa grandifolia 9.7 1.67 10 12.5 Cedrela odorata 3.07 12.75 17 Tabernaemontana macrocalyx 7.34 0.44 6.95 T. maxima 7.8 0.56 7.32 11 Annona muricata Averrhoa carambola T. heterophylla T. markgrafiana Sin actividad

Actividad de los extractos vegetales frente a las cepas de Staphylococcus aureus Extracto de planta Datos descriptivos de los halos de inhibición de los extractos contra S. aureus (mm) Promedio DS Mediana Valor Máximo Mínimo Alchornea triplinervia 17.92 2.95 18 23.5 13.5 Annona muricata 11.05 2.38 11 15 7 Averrhoa carambola 10.6 1.74 10 8 Brunfelsia grandiflora 10.9 2.87 7.5 Caraipa grandifolia 13.29 2.30 13 17.5 9.5 Cedrela odorata 16.7 3.13 16.5 24.5 Tabernaemontana heterophylla 17.66 1.28 17.9 22.3 15.7 T. maxima 23.3 1.76 23.41 25.3 22 T. markgrafiana 24.4 3.22 24.49 26.7 19.7 T. macrocalyx Sin actividad

Macrométodo de dilución en caldo Determinación de la Concentración Inhibitoria Mínima (CIM) y de la Concentración Bactericida Mínima (CBM) de los extractos vegetales activos frente a las cepas de P. aeruginosa y S. aureus CIM CBM Macrométodo de dilución en caldo < conc. cuyo subcultivo produce un número de UFC < al 0.1% del inóculo original.

CONCENTRACIÓN INHIBITORIA MÍNIMA (CIM) Y CONCENTRACIÓN BACTERICIDA MÍNIMA (CBM) DE LOS EXTRACTOS VEGETALES FRENTE A LAS BACTERIAS EN ESTUDIO EXTRACTOS Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus CIM (mg/ml) CBM (mg/ml) CBM Cedrela odorata 15.62 125 3.91 7.81 Alchornea triplinervia 62.5 250 Caraipa grandifolia 500 Averrhoa carambola S.A Annona muricata 31.25 Brunfelsia grandiflora Tabernaemontana macrocalyx T. heterophylla T. maxima T. markgrafiana S.A.: Sin Actividad

Screening fitoquímico Presencia de metabolitos con posible actividad antibacteriana Flavonas Triterpenos Alcaloides Cumarinas Antocianinas Antraquinonas Saponnas Esteroles

Alchornea triplinervia y Cedrela odorata, constituyen alternativas promisorias para combatir a Pseudomonas aeruginosa drogorresistentes, tan igual como lo son Tabernaemontana maxima y Tabernaemontana markgrafiana para Staphylococcus aureus drogorresistentes.

AGRADECIMIENTOS Al Centro de Investigaciones de Recursos Naturales de la Amazonia de la UNAP, por brindar el financiamiento al Proyecto de Investigación: SENSIBILIDAD A EXTRACTOS VEGETALES DE PATÓGENOS NOSOCOMIALES AISLADOS DEL HARDWARE DE COMPUTADORAS, CON ÉNFASIS EN BACTERIAS DROGORRESISTENTES. A los ex tesistas: A los tesistas: Daniela Da Cunha Najar Betsabeth Trinidad Guzmán Esther García Satalay Emperatriz Morales Amaringo Ricardo Abadie Saénz Manuel Ruiz Panaifo Ronald Medina Olimar Edgard Valderrama Rojas Cecilia Barbarán Urresti, Priscilla del Àguila Guevara Manuela Ruiz Miranda Karla Laury Silva Gavy Paredes Sánchez. Milca Eléspuru Shuña Janina Tello Lozano