Diagnóstico Virológico Bioq. Alejandro Kuc
Importancia Determinar una intervención terapéutica Definir el pronóstico en la evolución de un paciente Indicar la necesidad de una vacunación Adoptar medidas de salud pública en una comunidad: epidemiología. Tendencia: Sensibilidad y Rapidez Bioq. Alejandro Kuc
Métodos de Diagnóstico Directos: presencia de virus en muestras clínicas Agente infeccioso: aislamiento viral Partícula viral: microscopía electrónica Antígenos virales: inmunomarcación Genomas virales: biología molecular Indirectos: respuesta de anticuerpos específicos antivirales en el suero del paciente Bioq. Alejandro Kuc
Tipo de Muestras Virus respiratorios: aspirado nasofaríngeo Lesiones Cutáneas: raspado e hisopado Sangre: aislamiento viral Suero: búsqueda de anticuerpos (serología) Materia Fecal: enterovirus Orina: aislamiento de CMV LCR: enterovirus y parotiditis Muestras oculares: hisopado Tejidos: aislamiento viral o inmunohistoquímica Bioq. Alejandro Kuc
Transporte y conservación Aislamiento Inmediatamente (inactivación y contaminación) No congelar Conservación Temp amb: horas 4ºC: 1-2 días -20ºC: meses -70ºC: años Bioq. Alejandro Kuc
Métodos Directos Bioq. Alejandro Kuc
1- Aislamiento Viral Huevos, Animales o Células Tipos de cultivos celulares Primario: directamente del tejido humano o animal; 1-2 subpasajes Diploide: derivado del tejido fetal o de RN; 20-50 subpasajes Hetroploide: extraídas de tejido tumoral o tranformado; infinitos subpasajes Variación en suceptibilidad Es indispensable el Diagnóstico presuntivo Bioq. Alejandro Kuc
Inoculación e incubación (ATB) Decontaminar muestras no estériles Inocular en tubos de cultivo: de la muestra en medio con ATB 1 hr a 37º para permitir la adsorción Añadir medio de cultivo y cambiarlo cada 2-3 días. Bioq. Alejandro Kuc
Detección de los efectos de los virus Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y cultivo Tipo de ACP Wikipwdia Bioq. Alejandro Kuc
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Detección de los efectos de los virus Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y cultivo Hemadsorción Bioq. Alejandro Kuc
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Detección de los efectos de los virus Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y cultivo Hemadsorción Hemaglutinación Bioq. Alejandro Kuc
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Cuantificación de virus Detección de los efectos de los virus (Dx presuntivo: debe confirmarse) Acción citopatogénica: tipo, magnitud, velocidad y cultivo Hemadsorción Hemaglutinación Interferencia Identificación Inmunofuoresencia Imunoperoxidasa Cuantificación de virus Titulación de punto final Plaqueo bajo agarosa Bioq. Alejandro Kuc
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2- Microscopía Electrónica Métodos Inmunoelectromicroscopía Coloración negativa Ventajas Rápido (pocas muestras) Desventajas Costo del ME Baja Sensibilidad Bioq. Alejandro Kuc
3- Inmunoflourescencia Técnica Directa Indirecta Ventajas Muestra estable Muy Sensible Muy Específica Rápido Desventajas Costo del MF Observador experimentado Bioq. Alejandro Kuc
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4- Aglutinación Ventajas Desventajas Sencillo Rápido No requiere equipamiento Desventajas Poco especifica Bioq. Alejandro Kuc
5- Enzimoinmunoensayo (EIA) Ventajas Muy Sensible No se necesita observador experimentado Gran numero de muestras simultáneamente Automatizable Desventajas Falsos Positivos (necesita confirmación) Bioq. Alejandro Kuc
Enzyme Linked Immuno- Sorbent Assay ELISA Enzyme Linked Immuno- Sorbent Assay Bioq. Alejandro Kuc
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ELISA Competitivo Bioq. Alejandro Kuc
ELISA captura IgM Bioq. Alejandro Kuc
Tests Rápidos en un solo paso Bioq. Alejandro Kuc
5- Radioinmunoensayo (RIA) Fundamento idéntico a ELISA Ventajas Similar al ELISA Desventajas Reactivos Inestables Residuos Radiactivos Relativamente mas Costoso Bioq. Alejandro Kuc
Métodos Indirectos Bioq. Alejandro Kuc
Métodos Indirectos Detección de IgM Detección de IgG Seroconversión Infección aguda Infección congénita FR: f+ ↑ IgG: f- IgM Captura Detección de IgG Seroconversión Recién Nacidos Avidez Δ >4 títulos Bioq. Alejandro Kuc
Técnicas Aglutinación de partículas IFI EIA RIA Western Blott ELISA LIA RIA Western Blott Bioq. Alejandro Kuc
Western Blot Muy especifica Método confirmatorio Bioq. Alejandro Kuc
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Western Blot Bioq. Alejandro Kuc
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