Identificación y medición de la respuesta inmune PRUEBAS SECUNDARIAS

La prueba a realizar depende de las características del Ag SOLUBLE PARTICULADO SUPERFICIE + COMPLEMENTO PRECIPITACIÓN AGLUTINACIÓN FIJACIÓN DE COMPLEMENTO

Comparación precipitación - aglutinación Y Antígeno SOLUBLE Antígeno PARTICULADO Anticuerpo Y Y Formación de “retículo” “Amontonamiento” Y Y AGLUTINACIÓN PRECIPITACIÓN

PRECIPITACIÓN Fundamento: un antígeno soluble, al ser puesto en contacto con su anticuerpo específico, forma complejos inmunes que al encontrarse en proporciones óptimas se insolubilizan dando una reacción de precipitación

Y Y Y Y Precipitación MEDIO AC ESPECÍFICO PROPORCIÓN Ag SOLUBLE Ag/mg Exceso de AC Exceso de Ag Proporciones óptimas MEDIO PROPORCIÓN AC ESPECÍFICO Ag SOLUBLE Y Y Ag/mg Y Y RETÍCULO SOLUBLE

MEDIO LÍQUIDO SÓLIDO DIFUSIÓN DOBLE INMUNOELECTROFORESIS (IEF) Test de Ascoli - Valente CARBUNCLO DIFUSIÓN DOBLE INMUNOELECTROFORESIS (IEF) INMUNODIFUSIÓN RADIAL (IDR) CONTRAINMUNOELECTROFORESIS (CIEF)

Inmunodifusión en Gel de Agar DIFUSIÓN DOBLE Inmunodifusión en Gel de Agar Fundamento: empleando el medio adecuado (agar gel), es posible hacer migrar por difusión tanto Ag como Ac (difusión “doble”), de modo que al encontrarse en proporciones óptimas, interaccionen, produciendo una banda de precipitado visible Ejemplo: test de Coggins para diagnóstico de AIE

Test de Coggins para AIE Placa de Petri 5. Antígeno específico (reactivo) 7 1 3 5 4. Suero testigo (+) (reactivo) 2 4 6 3. Suero problema 2 6 7 4 2 6 7 4 1. Agar gel 1 2 6 7 5 4 3 1 6 2 7 5 3 4 2.Sacabocados

7. LECTURA (fondo oscuro) e INTERPRETACIÓN 6.Cámara húmeda 48 hs 7. LECTURA (fondo oscuro) e INTERPRETACIÓN A C B D. NEGATIVO E. Fuertemente POSITIVO F. POSITIVO 2 6 7 4 G I H D F E A. NEGATIVO B. POSITIVO C. Débilmente POSITIVO G. POSITIVO H. Banda INESPECÍFICA I. Banda INESPECÍFICA

APLICACIONES EN VETERINARIA ANEMIA INFECCIOSA EQUINA PIROPLASMOSIS EQUINA LEUCOSIS BOVINA BRUCELOSIS OVINA BRUCELOSIS CANINA

AGLUTINACIÓN Fundamento: un antígeno particulado (ejemplo: bacterias, eritrocitos), al ser puesto en contacto con su anticuerpo específico en proporciones óptimas, se une por medio de enlaces cruzados. Este complejo de unión agruma, produciendo una reacción de aglutinación.

FENÓMENO DE ZONA O PROZONA Se produce cuando existe un marcado exceso de Ac con respecto a los determinantes antigénicos de la partícula, de tal manera que es poco probable que los dos sitios de unión de la Ig puedan unirse a dos determinantes antigénicos de dos partículas distintas, inhibiéndose de este modo la aglutinación. Generalmente ocurre en las diluciones bajas de sueros muy positivos.

AGLUT I NAC I ÓN AGLUTINACIÓN AGLUTINACIÓN PASIVA COAGLUTINACIÓN HEMOAGLUTINACIÓN / INHIBICIÓN H. A.

Antígeno particulado (reactivo) Y Y Proporción + Antígeno particulado (reactivo) AGLUTINACIÓN Suero problema Medio

AGLUTINACIÓN En PLACA En TUBO Salmonella Brucella Micoplasma Brucella BPA SAT+2-ME PAL

Aglutinación en placa: BPA Prueba del Antígeno Brucélico Acidificado 1. Suero problema 2. Antígeno específico (reactivo) Aglutinoscopio + placa de vidrio

LECTURA E INTERPRETACIÓN 8 MINUTOS 3. Mezclar LECTURA E INTERPRETACIÓN Con GRUMOS Sin GRUMOS AGLUTINACIÓN POSITIVA Negativa

Aglutinación en tubo: SAT + 2-ME SAT (Seroaglutinación en Tubo) Se realizan en simultáneo Ig M Ig G 2- ME (2- Mercaptoetanol)

En TUBO: SAT + 2- ME 60 MINUTOS SUERO BPA (+) SAT 1/25 1/50 1/100 2. Solución fisiológica fenicada (SFF) 1. Suero problema 3. Antígeno 60 MINUTOS SUERO BPA (+) SAT 37ºC-48 hs 1/25 1/50 1/100 1/200 Título 2-ME 2. Solución 2-ME

LECTURA e INTERPRETACIÓN 37ºC-48 hs INCOMPLETA NEGATIVA POSITIVA

Aglutinación en tubo: PAL PRUEBA DEL ANILLO EN LECHE Fundamento: si en una muestra de leche se encuentra un anticuerpo específico, y se le agrega un antígeno particulado coloreado, ambos se unirán, formando un complejo Ag-Ac que se adhiere a los glóbulos de grasa y asciende con la nata

LECTURA e INTERPRETACIÓN PAL 2. Antígeno (reactivo) 1. Leche problema LECTURA e INTERPRETACIÓN 37ºC-1 hora + ++ +++ ++++

BRUCELOSIS BOVINA APLICACIONES EN R. A. BPA – ELISA I SAT + 2-ME – FPA Prueba TAMIZ BPA – ELISA I COMPLEMENTARIAS SAT + 2-ME – FPA ELISA C DEFINITORIA FC VIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA PAL - ELISA I

PRUEBAS TERCIARIAS IN VITRO NEUTRALIZACIÓN PROTECCIÓN IN VIVO

NEUTRALIZACIÓN Fundamento: estimación de la capacidad de una anticuerpo de neutralizar la actividad biológica de un antígeno cuando se mezcla con él in vitro

PROTECCIÓN Fundamento: forma de análisis de neutralización que se realiza totalmente in vivo para determinar la capacidad protectora de un anticuerpo específico frente a su antígeno

RESPUESTA INMUNE CELULAR PURIFICACIÓN DE LINFOCITOS IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS T IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS B PRUEBA DE FUNCIÓN DE LINFOCITOS