Determinación de HPV en patología cervical: implicaciones diagnósticas y clínicas José Ramón Ramírez García Hospital Militar Central Gomez-Ulla

CANCER CERVICAL INICIO DE RELACIONES SEXUALES A EDAD TEMPRANA PROMISCUIDAD SEXUAL MARIDOS CON CANCER DE PENE

EL CANCER CERVICAL PUEDE SER CAUSADO POR UN AGENTE TRANSMISIBLE HPV

VIRONES HPV EN LOS COILOCITOS ME DESCRIPCION DEL COILOCITO (KOSS) CAPSIDES DE HPV EN LSIL INMUNOHISTO DNA-HPV EN CANCER CERVICAL PAT.MOLECULAR PATOLOGIA

 Aislado en 1933:  Papovaviridae.  Virus DNA  Epidermotropo  Capside icosahedríca. Caracterizacion de HPV

 Se han secuenciado 80 genomas:  Infección mucocutánea.  Epidermodisplasia verruciforme  Transmisión sexual. Caracterizacion de HPV

Transmisión sexual. Tres grupos: Bajo riesgo o benignos: 6,11,30,34,40,42,43,44,53,55,57,60 Caracterizacion de HPV

 Lesión escamosa intraepitelial:  Bajo riesgo:  31,33,35,51,52.  Alto riesgo:  16, 18,45,46 Caracterizacion de HPV

Principal sitio de infección: epitelio escamoso. células primitivas o de reserva. Intervalo de la exposición hasta la lesión: 6-24 semanas.

HPV LATENTEPRODUCTIVA Infeccion viral sin producción de virus infeccioso Virus en el núcleo No alteraciones citopaticas Produccion de virones Células Superficiales Alteraciones Citopáticas

ALTAMENTE ESPECIFICO 90% POCO SENSIBLE PARA SU DETECCIÓN 60% APARECEN 3 MESES DESPUES DE LA INFECCION GENITAL POR EL VIRUS

CRITERIOS DIAGNOSTICOS CELULA AFECTADA: –C. ESCAMOSA MADURA –C. ESCAMOSA INMADURA QUERATINIZADA –C. INDIFERENCIADA ZONA DE TRANSFORMACION. FORMA CELULAR: –PERDIDA DE FORMA POLIGONAL

CRITERIOS DIAGNOSTICOS PERIFERIA DE CITOPLASMA –ENGROSADO EN ASA DE ALAMBRE TAMAÑO CELULAR: –ISO Y ANISOCITOSIS –CITOPLASMA: –COILOCITOSIS

CRITERIOS DIAGNOSTICOS CAMBIOS ASOCIADOS: –DISQUERATOSIS –PARAQUERATOSIS –HIPERQUERATOSIS

Genes tempranos: E1,E2,E4,E5,E6,E7. E2: codifica dos productos protéicos:estimula,inhibe. E4:proteínas para replicación y maduración. E5,E6,E7: transformadoras de virus. INICIO CAPA BASAL DEL EPITELIO

GENES TARDIOS: L1,L2: Fase final codifican proteínas de la cápside. Solo cuando la células escamosa se diferencia (célula intermedia y superficial). Producción de partículas virales completas.

E6 p53 IMPOSIBILIDAD DE DETENER SU CRECIMIENTO E7 RETINOBLASTOMA MULTIPLICACION DESCONTROLADA

EPIDEMIOLOGIA Hibridación in situ: –Secuencias de nucleotidos: 10-30% epitelios metaplásicos normales. (15-49 años). –PCR: 49% –LSIL: genoma viral: 29-75%. –HSIL: genoma viral: 90%. –Carcinoma invasivo: 99,8% –Adenocarcinoma invasivo: 90%.

EPIDEMIOLOGIA Prevalencia: mujeres menores de 25 años. HPV de alto riesgo:

EPIDEMIOLOGIA El 30% de las mujeres HPV-16 desarrollaron HSIL en dos años. HPV-16: carcinomas no queratinizantes. HPV-18: carcinomas pobremente diferenciados.

EPIDEMIOLOGIA LSIL: –DESAPARECE: 50%. –PERMANECE: 40%. –EVOLUCIONA:10%. HSIL –DESAPARECE: 20% –PERMANECE:40% –EVOLUCIONA:40%

EPIDEMIOLOGIA INFECCION POR HPV: –Factores genéticos. –Periodo de latencia largo. –La infección de HPV es un evento de una larga cadena.

METODOS DE DETECCION SEROLOGIA: –No permite identificar tipos específicos de HPV. –Métodos de detección de DNA viral muy costosos y dificultad técnica.

METODOS DE DETECCION METODOS DE DETECCION TRADICIONAL: –MICROSCOPIA DE LUZ. –MICROSCOPIA ELECTRONICA. –INMUNOHISTOQUIMICA.

MICROSCOPIA DE LUZ No específica. Método mas frecuente. COILOCITOSIS CAMBIOS EN TAMAÑO DE NUCLEO. GRADO DE ATIPIA No permite la determinación de genotipo específico.

MICROSCOPIA ELECTRONICA Método costoso Mucho tiempo. Bajo rendimiento. No permite la determinación de genotipo específico.

INMUNOHISTOQUIMICA Facilmente reproductible. No muy cara. Realizada en parafina. Alta sensibilidad en lesiones de LSIL. Baja sensibilidad en lesiones HSIL y carcinomas.

METODOS DE DETECCION DETECCION MOLECULAR SIN PRESERVACION TISULAR MORFOLOGICA: –Hibridacion por Southern blot: Muy específico Difícil, mucho tiempo, influencia de factores externos.

DETECCION MOLECULAR SIN PRESERVACION TISULAR MORFOLOGICA: –Hibridacion Dot/slot blot: Fácil y rápido, permite muchas muestras. –Hibridación capture-test: Específico, no problemas de contaminación. –PCR: Específico y muy sensible. Contaminación cruzada- Falsos positivos.

METODOS DE DETECCION DETECCION HPV CON METODOS QUE PRESERVAN EL TEJIDO: –Hibridación in situ: Poco sensible. Solo detecta infecciones productivas. No puede detectar el tipo de DNA presente. –FISH: Poco sensible y especifico. –PCR in situ

BIOMARCADORES PCNA: raro en epitelio normal. –Positividad en LSIL en capas altas. –Falsos positivos en metaplasias escamosas. –90% de los canceres.

BIOMARCADORES Ki67: PERMITE DIFERENCIAR LSIL –vs CAMBIOS REACTIVOS. –ATROFIA –METAPLASIA INMADURA

BIOMARCADORES TELOMERASA –De gran ayuda. –Costosa de realizar.

TELOMERASA Los telómeros son los extremos de los cromosomas y es una secuencia de nucleotidos que se repiten un número variable de veces: –TTAGGG Sirven para evitar la degradación celular, recombinaciones inadecuadas, y el envejecimiento celular.

TELOMERASA Una célula normal en las sucesivas divisiones sufre acortamiento de los telómeros a diferencia de las células cancerígenas y células hematopoyéticas primitivas donde un enzima la telomerasa restituye estos fragmentos. (Fenotipo inmortal)

TELOMERASA CELULA NORMAL TELOMERASA CELULA NEOPLASICA

TELOMERASA 80% cáncer cervical presentan actividad telomerasa. Se detecta en estadios precoces de carcinoma y lesiones preneoplásicas. MARCADOR POTENCIAL DE LA DETECCION PRECOZ DEL CARCINOMA CERVICAL

BIOMARCADORES CICLINA E –LSIL vs cambios reactivos. –HSIL vs Metaplasia inmadura. –Atrofia VS HSIL

BIOMARCADORES P16: –Neoplasia vs HPV infección. –Marcador para HPV de alto riesgo. –Screening en citología? –Poco util en HPV de bajo riesgo.

 INFORMACION A LA POBLACION:  Salud Pública.  Campañas de Sanidad Conclusiones

 IDENTIFICACION DE PACIENTES DE RIESGO:  Datos epidemiológicos.  Campañas citológicas:  LESION INTRAEPITELIALES DE SEVERIDAD VARIABLE:  ASCUS  LSIL  HSIL-CARCINOMA

Conclusiones  ASCUS:  Citología:  Biomarcadores POSITIVOS:  LSIL-HSIL

Conclusiones  PACIENTE CON PROBABLE INFECCION HPV (detección visual).  Colposcopia.  Biopsia.

Conclusiones  PACIENTE CON PROBABLE INFECCION HPV: BIOPSIA:  Diagnosticar Severidad de lesión.  LSIL  HSIL-CARCINOMA

Conclusiones  PACIENTE CON LESION INTRAEPITELIAL CERVICAL:  Categorizar el tipo de HPV:  Alto riesgo o bajo riesgo.  Utilizar biomarcadores de detección.

Conclusiones  TRATAMIENTO:  LSIL: SEGUIMIENTO.  HSIL-CARCINOMA: CONIZACION O HISTERECTOMIA.  SEGUIMIENTO: volver a empezar el ciclo.