Proteínas III Organización de la clase Plegamiento y desplegamiento. Caso de la ribonucleasa Chaperonas, Priones Proteínas autofluorescentes

Albúmima de huevo se desnaturaliza y “agrega” q ¿Plegamiento o folding Qué le pasa a una proteína frente a altas temperaturas o PH extremo? Albúmima de huevo se desnaturaliza y “agrega”

y con agentes químicos como urea o guanidinio?

ejemplo: Ribonucleasa Plegamiento o folding ejemplo: Ribonucleasa Christian Anfinsen Premio Nobel 1972

Plegamiento o folding Si a la proteína desnaturalizada por 1) MSH 2) calor o urea se enfría lentamente y/o se elimina la urea, vuelve a adquirir actividad → Dogma de Anfinsen (1950-1960s): La estructura 3-D nativa determinada sólo por secuencia de aminoácidos (estructura 1ia) No es válido para todas las proteínas Además: chaperonas

CHAPERONAS las chaperonas favorecen el plegamiento plegado chap llega rápido desplegado ejemplos: Hsp (heat-shock proteins) chap llega tarde las chaperonas favorecen el plegamiento de sus proteínas sustrato → proteínas “nativas”

CHAPERONAS ejemplo: GroEL (60 kDa) + GroES (10 kDa) GroEL: 2 anillos superpuestos de 7 subunidades iguales cada uno formando un “barril” conformación plegada conformación desplegada es “masajeada” dentro del barril las chaperonas favorecen el correcto plegamiento de sus proteínas sustrato → proteínas “nativas”

PRIONES (PRoteína-INfecciosos) Enfermedad de las vacas locas (Encefalopatía bovina espongiforme) Scrapie en ovejas Creutzfeldt–Jakob disease (CJD) en humanos Stanley Prusiner Premio Nobel1997

¿cómo se explica a nivel molecular? fibras al microscopio agujeros en cerebro que semeja esponja ¿cómo se explica a nivel molecular?

la proteína sustrato y el prion tienen la misma secuencia! soluble insoluble CHAPERONA patógena modelo del multímero lineal. Explica la formación de las fibras observadas la proteína sustrato y el prion tienen la misma secuencia!

Pregunta: ¿la existencia de proteínas tipo priones puede generar perpetuación de una rara conformación proteica, en sucesivas divisiones celulares? En otras palabras, ¿puede existir herencia a nivel proteico? Respuesta: para pensar en el colectivo, a discutir en clase

POLIPEPTIDOS FLUORESCENTES 1970s: Osamu Shimomura purificó a partir de la medusa bioluminiscente Aequorea victoria una proteína que, iluminada con luz azul, fluorescía verde : GFP (Green Fluorescent Protein) En los 90s, Douglas Prasher secuenció gen GFP , y al quedarse sin financiamiento, se la envió a Martin Chalfie, quien expresó el gen en bacterias. Para su sorpresa, al ser iluminadas con luz azul, las bacterias se veían verdes y dedujo que la “información” para que GFP fluorezca estaba contenida en su propia secuencia

en 2008 Shimomura, Chalfie y Tsien premios Nobel en Química. fragmento aislado responsable de la absorción del color azul de toda la proteína: tripéptido Ser65 - Tyr66 - Gly67. Fluoresce sólo en entorno hidrofóbico Roger Tsien (1952-2016) mutaciones al azar en gen GFP y expresar en bacterias: → azules, celestes o amarillas: Tyr66  His66 azul Tyr66  Trp66 celeste Thr203  Tyr203 amarilla GFP y sus derivadas en la “paleta de colores” extendida por Tsien revolucionaron la investigación en biología celular y molecular porque permitieron “marcar” proteínas en células vivas y observar su localización. en 2008 Shimomura, Chalfie y Tsien premios Nobel en Química. Prasher, que se vio forzado a dejar la ciencia, trabajaba de chofer de colectivos y se enteró por la radio Ser Tyr Gly pregunta para ejercitación: ¿qué pasaría con la fluorescencia frente a SDS o urea?