CULTIVOS Métodos Tradicional y Automatizado Dra. Susana Poggi Lab. de Micobacterias “Dr. Abel Cetrangolo” Cátedra de Neumonología – Inst. “Dr. Raúl Vaccarezza” Hospital F.J. Muñiz.

CARACTERISTICAS DEL CULTIVO Complementa a la baciloscopía, pone en evidencia bacilos viables de la muestra (10 – 100 b/ml). Tiene mayor sensibilidad, es más compleja y más cara que la baciloscopía. Caracteriza los bacilos y permite diferenciar el M. tuberculosis del MOTT. Permite hacer ATB. Tiene 100% de especificidad. Es el método de referencia con el que se tiene que evaluar todo nuevo método.

REQUERIMIENTOS QUE LIMITAN LA IMPLEMENTACION DE CULTIVOS Mayor dedicación del personal. Entrenamiento en prácticas de mayor riesgo biológico. Equipos de mediano y alto costo con mantenimiento asegurado. Laboratorio espacioso con direccionamiento y purificación del aire.

POBLACIONES MICROBIANAS EN LAS LESIONES DE LA TUBERCULOSIS HUMANA

FORMAS DE PRESENTACION SEGÚN MEDIO DE CULTIVO Formación de colonias en medio sólido (Löwenstein Jensen y Stonebrink). Turbidez en un caldo (Dubos). Cambio de color en sensor incorporado (MBBact) o emisión de fluorescencia (MGIT) cuando el bacilo libera CO2 o consume O2. Medición con isótopos radiactivos de CO2 (Bactec 460) liberado por las micobacterias y medido en una escala.

COMPOSICION DEL MEDIO DE LÖWENSTEIN-JENSEN

COMPOSICION DEL MEDIO DE STONEBRINK

COMPOSICION DEL MEDIO DE MIDDLEBROOK

PREPARACION DE MUESTRAS PARA REALIZAR CULTIVOS Muestras con flora acompañante decontaminar con NaOH al 4% (se puede agregar Nacetil-cisteína ) neutralización con SO4H2 al 12% lavado con agua (método de Petroff). Muestras tomadas asépticamente de sitio estéril: se siembran sin tratar y tratadas con el método de Petroff.

SEGUIMIENTO DEL CULTIVO Siembra Verde (ácido) Amarillo (básico) A las 48 hs se tapa, se revisa que no hubiera contaminación. Revisar la estufa cada 7/10 días. Sacar los positivos e informar. Descartar los negativos a los 60 días.

LECTURA DE CULTIVOS Fecha en que se observó el cultivo. Cuantificación de colonias Positivo 1 a 19 colonias + 20 a 100 colonias ++ +100 colonias separadas +++ colonias incontables Morfología de las colonias (rugosas, lisas, otras características peculiares) Pigmentación (no pigmentada, amarillenta, anaranjada)

CARACTERISTICAS DEL BACILO La luz solar, la desecación y el calor son bactericidas. El fenol, formol, formalheido e hipoclorito de sodio son letales. Puede resistir a bajas temperaturas. (2 a 4º C hasta -70º C). También a ciertos desinfectantes como trifosfato de Na y a bases fuertes como el NaOH. Se divide cada 18/24 hs, es aeróbeo y una atmósfera de CO2 al 10% favorece su crecimiento.

IDENTIFICACION DEL M. tuberculosis Colonias rugosas, secas de color crema. Test de identificación positivo y NAP. Métodos moleculares (sondas). Pruebas bioquímicas. Niacina + Catalasa inhibida a 68º C Nitratasa + Velocidad de desarrollo lenta.

MEDIOS LIQUIDOS Dubos Cepario Reactivación de cepas CIM Middlebrook Bactec MBBact Mgit