Métodos rápidos de identificación. Métodos basados ​​en el ADN para la detección de bacterias patógenas transmitidas por los alimentos Ever Hernández Olivas Universidad Autónoma de Chihuahua Facultad de Ciencias Químicas Microbiología de Alimentos

Reservorio (animales y por línea de producción). Introducción. Enfermedades - bacterias patógenas La detección de bacterias patógenas (presentes en bajo número) Escondidas en las matrices alimenticias y pueden estar superadas por el número por un alto contenido de bacterias propias. Reservorio (animales y por línea de producción). Humanos

Métodos tradicionales (Etapas de enriquecimiento y pre-enriquecimiento) Son laboriosas y consumen mucho tiempo Acelerar la detección de bacterias patógenas Incrementar la sensibilidad a la detección

Ejemplos de tecnologías que se han aplicado para mejorar los métodos para la detección de bacterias patógenas en los alimentos.

Ventajas y los problemas generales de los métodos basados ​​en el ADN para la detección y caracterización de bacterias patógenas transmitidas por los alimentos en comparación con los métodos basados ​​en la cultura tradicional Aplicación Ventajas Problemas Detección directa de patógenos en alimentos No requiere cultivación Puede detectar células muertas (PCR). Alto nivel de detección debido a un volumen de prueba pequeño. Inhibición debido a los componentes de los alimentos. Muy sensibles a contaminación de alimentos.   confirmación de cultivo en caldos de enriquecimiento Rápido y sensible Posible detección automática Insensible a altas concentraciones de microbiota propia No se obtiene una colonia, y por eso más adecuado para detectar muestras negativas. Caracterización de bacterias patógenas obtenidas de muestras de alimentos Puede separar bacterias virulentas de las no virulentas por focalización de genes virulentos Es posible la caracterización múltiple Otras aplicaciones Puede detectar específicamente organismos genéticamente modificados.

Metodología para la detección e identificación de bacterias patógenas por métodos basados en ADN. 20-30 años Conocidos por las personas que se ocupan de la microbiología alimentaria La capacidad de dos moléculas de ADN de cadena sencilla in vitro, en las condiciones adecuadas, para formar ADN de cadena doble mediante apareamiento de bases específicas (hibridación).

Métodos diferentes basados en el apareamiento de bases específicas hibridación de colonias, una sola fase, ensayos de hibridación de líquidos, PCR Relevantes para la detección de bacterias en los alimentos.

PCR (Reacción de polimerización en cadena) Desnaturalización de ADN de la muestra para obtener cadenas simples objetivo. Unión de primers específicos a el ADN objetivo. La polimerización de ADN.

Rápida Sensible Especifica Proceso simultaneo (gran numero de muestras)

Problemática en la aplicación de PCR en alimentos.

Detección de reacción positiva Puede hacerse mediante la demostración del fragmento de ADN correcto mediante electroforesis en gel de agarosa Máquinas de PCR semi-automatizadas existentes en el mercado hacen una determinación cuantitativa de bacterias patógenas a partir de cultivos puros posibles.

Métodos confiables desarrollados para las bacterias patógenas pertinentes.

Salmonella Escherichia coli Coliformes Shigella Vibrio cholerae y no cholerae Yersinia Enterocolitica Campylobacter Listeria monocytogenes Staphylococcus aureus Bacillaceae

Bibliografía Probes and polymerase chain reaction for detection of food-borne bacterial pathogens, J.E. Olsen et al, International Journal of Food Microbiology 28 (1995) 1-78 DNA-based methods for detection of food-borne bacterial pathogens, John Elmerdahl Olsen *, Food Research International 33 (2000) 257±266. Detección de patógenos alimentarios mediante técnicas de PCR, B. Martín, M. Garriga, J.M. Monfort y T. Aymerich, IRTA. Tecnología de los Alimentos. Monells, 2009.