UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL DEL TÁCHIRA VICE-RECTORADO ACADÉMICO DECANATO DE DOCENCIA DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA AGRONÓMICA EVALUACIÓN IN VITRO DE LA CAPACIDAD ANTAGONICA DE CEPAS DE Trichoderma spp. PARA EL BIOCONTROL DE Moniliophthora roreri. Autor: Darwin Nolberto Medina Durán Tutor: Ing. Msc Vera Calderón Rosa Isabel

Evaluar el potencial de cepas de Trichoderma spp Evaluar el potencial de cepas de Trichoderma spp. como biocontrolador de M. roreri, en condiciones de laboratorio. O B J E T I V O S GENERA L

O B J E T I V O S E S P E C Í F I C O S Evaluar la capacidad de cepas de Trichoderma spp. para inhibir el crecimiento de M. roreri en medio de cultivo Identificar los mecanismos de acción de Trichoderma spp. como agente de biocontrol de M. roreri en condiciones de laboratorio. Verificar el efecto de los metabolitos no volátiles de cepas Trichoderma spp para controlar el crecimiento de M. roreri en condiciones de laboratorio O B J E T I V O S E S P E C Í F I C O S

Planteamiento del problema Necrosis, deformación y pudrición (Reuck, 1997). Causante de la moniliasis del cacao En Venezuela 20 y 80% (Sánchez et al, 2003). 20% -30% Perdidas de (Jorgensen, 1970). No atendida técnicamente 95% 60 a 80 días desarrollo completo. Cero síntomas externos, tejido interno necrosado (Reuck, 1997).

Incremento de gastos Perdidas económica

Trichoderma spp Habilidad de sobrevivir bajo condiciones muy desfavorables y en todas las latitudes. (Rodríguez, 1990). Eficiencia en la utilización de nutrientes. Capacidad de modificar la rizosfera. Eficiencia en la promoción de crecimiento de las plantas y mecanismo de defensa. Fuerte agresividad contra el hongo fitopatógeno. (Fernández, 2001) y (Benitez et al, 2004)

Amplitud de rango antagónico (Benitez et al, 2004) y espeficifidad (Chet, 1998). Rhyzoctonia Mucor Pythium Phytophthora Fusarium Rhizopus Botrytis Colletotrichum Sclerotium

Marco Legal Constitución de la Republica Bolivariana de Venezuela Art 305 Ley de salud agrícola integral. Titulo III Capitulo I Art 48 al 50

Evans et al. (2003) encontraron varias cepas de micoparásitos con potencial para controlar la monilia, siendo estas: Trichoderma ovalisporum Samuels & Schoers, sp Estudios de Benitez et al, (2004), arrojaron que los agentes de biocontrol mas comunes del genero Trichoderma spp son las especies T. viride y sobre todo T. harzianum. A N E T E S E D E N T E S

Yánez (2003), produjo y formulo biopreparados a base de Trichoderma spp para el control de M. roreri, el cual resulto ser antagonista eficiente en condiciones de laboratorio. Useche (2007), evaluó cuatro especies de T. harzianum y dos de T. virens, reportando antagonismo por micoparasitismo y antibiosis, en todos los enfrentamientos. Siendo el T. harzianum (LIG066) quien presentó el mayor poder como biocontroldor. A N E T E S E D E N T E S

Controlador biológico Trichoderma spp Hypocreaceae Hypocreales Hypocreomycetidae Sordariomycetes Pezizomycotina Ascomycota Fungi

Reproducción asexual: por esporas. Crece, ramifica, desarrollando hifas fungales de 5 a 10 μm de diámetro. Reproducción asexual: por esporas. Sexual: en pocas y no consideradas para biocontrol. Conidiosforos unicelulares ramificados rectos o curvados Foto:Itamar Soares de Melo Hialinas comúnmente de color verde + o - cónicos. Paredes lisas o estriadas. (Acevedo, 1995) (Agrios, 1996) (Harmanhialinas , 2000).

Clamidosporas unicelulares, pero pueden fusionarse entre dos o mas. Globosas o con menor frecuencia elipsoidales Conidiosporas débiles y no septadas Foto:Itamar Soares de Melo Ubicación intercalar o terminal Fialides en forma de botellas simples o en racimos Difieren en el grado de su frecuencia, tamaño y sitio de ocurrencia. Colonias de distintos grados de vellosidad y/o compactación (Acevedo, 1995) (Agrios, 1996) (Harmanhialinas , 2000).

Patógeno Moniliophthora roreri Marasmiaceae Agaricales Agaricomycetidae Agaricomycetes Agaricomycotina Basidiomycota Fungi

El patógeno permanece en el estado de conidias. Variabilidad de color del micelio (blanco, crema, hasta el pardo). Borde regular y textura pulverulenta . (Phillips-Mora 2006) y (Pérez 2008).

C O N I D A S Globosa Sub-globosa Elipsoidal Longitud media 8-15 μm Evans (1978) A: 7 μm L: 10,5 μm C O N I D A S Globosa A: 6,3 μm Sub-globosa L: 9,3 μm A: 7,5 μm Elipsoidal L: 11,6 μm (Holiday, 1970) y (Villavicencio, 2010)

Mecanismos de acción de Trichoderma spp Antagonismo por Antibiosis

Antagonismo por Competencia Antagonismo por micoparasitismo (Galeano et al., 2009)

Adhesión y enrollamiento (Danay, 2009)

Actividad lítica (Danay, 2009)

Moniliophthora roreri Trichoderma sp. = 9 días > M E T O D O L O G I A Capsulas de petri con cultivo agar V8 Cinta pegante Cepario de hongos del Laboratorio de Investigaciones Genéticas de la UNET Trichoderma sp Moniliophthora roreri 15 cepas de Trichoderma del estado Táchira (Acevedo, 1995).

Observaciones M E T O D O L O G I A Microscópicas Microscópicas Fotos (Suarez, 2008)

C R E I M I M C E L N T A O Cada 12 horas Por 7 días Los datos se analizaran de manera descriptiva Curvas de crecimiento

Cepas de Trichoderma spp.

Método de cultivo dual Dennis y Webster (1971a) PICR = R1 – R2 x 100 R1 Donde: PICR: Porcentaje de Inhibición del Crecimiento Radial. R1: Diámetro del testigo. R2: Diámetro del organismo ensayado.

Para determinar si existen diferencias significativas entre los parámetros evaluados, se realizará el análisis de varianza (ANOVA). Previo a ello se realizaran las pruebas de normalidad (Kolmogorov Smirnov) y la homogeneidad de varianzas (Levene). Para ello se utilizará el Software INFOSTAT, versión Estudiantil y el SPSS versión 12.0. Para determinar si existen diferencias significativas entre los parámetros evaluados, se realizará el análisis de varianza (ANOVA). ANOVA MULTIVARIADO Infostat (2002). Versión 1.1 A N A L I S I S E S T A D I S T I C O

Esta investigación se llevará a cabo en las instalaciones de los laboratorios de Investigaciones Genéticas (LIGUNET) y Fitopatología de la Universidad Nacional Experimental del Táchira. Las cepas de el patógeno Moniliophthora roreri, y el antagonista Trichoderma spp están disponibles en el cepario de hongos del LIGUNET y se cuenta con la tutoría de la Prof. Rosa Vera responsable de este laboratorio. V I A B I L I D A D

Para el financiamiento se cuenta con el apoyo del Decanato de Investigación, ya que este proyecto esta enmarcado en un proyecto del LIGUNET denominado “Selección de cepas nativas de Trichoderma con potencial para el uso en el campo agrícola” Código 02-008-10 aprobado en concejo de decanato. V I A B I L I D A D

HORAS T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 T10 T11 T12 T13 T14 T15 T0 12 1 2 3 TRATAMIENTO REPETICIONES T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 T10 T11 T12 T13 T14 T15 T0 12 1 2 3 24 36

SEMANAS Mes 1 Mes 2 Mes 3 Mes 4 Actividad 1 2 3 4 Preparación del medio PDA Aislamiento de Moniliophthora roreri Inoculación de Moniliophthora roreri Inoculación de Trichoderma spp Evaluación de crecimiento de Moniliophthora roreri Observación de antagonismo de Trichoderma spp