Third International Congress on Pharmacology of Natural Products Fapronatura 2012 Third International Congress on Pharmacology of Natural Products June 6-10, 2012 www.fapronaturacuba.com Evaluación de la actividad antimicrobiana de Spondias mombin L. Yalina Perez-Portero1, Franklin Suaréz López, Miladis Camacho Pozo2, Bigan Hung Guzman1, Mireya Garcia Garrido1 Departamento de Biología, Facultad de Ciencias Naturales, Universidad de Oriente. Centro de Estudios de Biotecnología Industrial (CEBI), Universidad de Oriente, Santiago de Cuba, Cuba.

INTRODUCCIÓN Spondias mombin L. es un árbol de amplia distribución tropical, pertenece a la familia Anacardiaceae. Llamado comunmente ¨ciruelo¨, ¨jobito¨. Se ha usado tradicionalmente para preparar infusiones y tratar malestares del tubo digestivo, dolor de garganta, fiebre de malaria, diarrea y anticonceptivo. La decocción de la corteza del tallo o la raíz son consideradas como antiséptico (Roig, 1965). Pío-Correa (2005) también se refiere a los usos de esta planta en Brasil como astringente, aromática como vomitivo en caso fiebres biliosas y palúdicas. Esta planta se emplea ampliamente como antidermatofítico, siendo la corteza del tallo la parte más empleada en decocciones (Pérez-Portero et al., 2009). Estudios fitoquímicos previos permitieron conocer la presencia de sustancias de tipo fenólico (taninos, saponinas, flavonoides, cumarinas) compuestos con reconocida actividad antimicrobiana y es objetivo del siguiente trabajo: Evaluar la actividad antimicrobiana ¨in vitro¨ de los extractos acuosos y alcohólicos obtenidos de Spondias mombin en cepas de microorganismos como: Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli y Candida albicans, especies microbianas de importancia clínica.

MATERIALES Y MÉTODOS Colecta del material vegetal Identificación botánica Lavado y fragmentación ( 50 g) Obtención de los extractos (6) (Maceración 48 h) agua , alcohol-agua 70:30 % Depósito en el herbario (BSC) Actividad antimicrobiana Ensayo antimicrobiano Determinación de CMI y CMB La actividad antimicrobiana se determinó por el método de difusión en disco o Kirby-Bauer. corteza de raíz, tallo y hojas de árboles vivos y adultos, en el poblado El Caney, Santiago de Cuba. Se identificó en el Centro Oriental de Ecosistemas y Biodiversidad (BIOECO). Enterococcus faecalis ATCC 29212; Staphylococcus aureus ATCC 25923; Escherichia coli ATCC 2592; Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 y Candida albicans CCEBI 2048, conservadas en la Colección de cultivos del Centro de Estudios de Biotecnología Industrial (CCEBI)

Determinación de fenoles totales El contenido de fenoles en los extractos se determinó por el método de Folin-Ciocalteu (Merck) (Velioglu et al., 1998), como ácido gálico (AG) en equivalente Los extractos se estandarizaron por el contenido de dichos compuestos. El procedimiento realizado consistió en añadir, 25 mL de agua destilada; 2,5 mL del Reactivo Folin-Ciocalteu y 10 mL de Carbonato de Sodio 20%. Luego, se enrasó a 50 mL con agua destilada, se agitó para homogenizar y se dejó reposar por 30 minutos. Se utilizó el agua destilada para la preparación del blanco reactivo. La absorbancia de la muestra fue medida a una longitud de onda de 765 nm en espectrofotómetro (Rayleigh). El ensayo se realizó por triplicado. Análisis Estadístico Los análisis estadísticos se llevaron a cabo para la determinación de la actividad antimicrobiana, en los mismos se realizaron Diseños Completamente En cada experimento se realizaron 3 réplicas y para la determinación de la actividad antimicrobiana, se realizó una Anova bifactorial. Para la cuantificación de las concentraciones de los compuestos fenólicos se realizó una Anova de Clasificación Simple para datos paramétricos (DUNCAN). Se empleo el paquete estadístico Origin 7.5

RESULTADOS Y DISCUSIÓN Tabla 1: Zonas de inhibición para extractos acuosos de corteza de raíz , corteza de tallo y hojas de Spondias mombin L. (Jobo). Microorganismos Extractos Acuosos Alcohólicos Control + Control - 1 2 3 A B C Ac Al Enterococcus faecalis 13.1 - 14.3 21.6 35 21.5 Escherichia coli 12 25.1 25 Staphylococcus aureus 19.5 16 20 29.7 26.5 Pseudomonas aeruginosa 14.8 12.1 22.8 20.5 . Candida albicans 11.5 Leyenda: 1-Extracto acuoso de hojas 2-Extracto acuoso de corteza de tallo 3-Extracto acuoso de raíz A- Extracto alcohólico de hojas B- Extracto alcohólico de corteza de tallo C- Extracto alcohólico de raíz Control +Ac y Al+ Ciprofloxacina 5µg, Ketoconazol 30 µg Control- Ac- Agua Control- Al- Alcohol Los valores de las zonas de inhibición expresados en mm.

Determinación de la concentración mínima inhibitoria (CMI) y la concentración mínima bactericida (CMB) Tabla 2 : Valores de Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) y Concentración Mínima Bactericida (CMB), para extractos acuosos y alcohólicos. Microorganismos Extractos acuosos Extractos alcohólicos 1 3 A CMI CMB Enterococcus faecalis 0.019 0.317 0.039 0.004 Escherichia coli - Staphylococcus aureus >0.317 Pseudomona aeruginosa 0.009 Leyenda: Los valores en mg / mL. (-) extractos que resultaron con valores negativos ante el test de Kirby-Bauer. (1) extracto acuoso de hojas. (3) extracto acuoso de corteza de raíz. (A) extracto alcohólico de hojas.

Compuesto fenólico equivalentes en mg/mL Determinación de compuestos fenólicos en extractos de Spondias mombin L. Tabla 3: Concentración de compuestos fenólicos equivalentes en extractos de Spondias mombin L. (jobo) Órganos Extractos Compuesto fenólico equivalentes en mg/mL EAG y=0,927x+ 1,336 R2 = 0,9997 EA y=14,61x+ 0,953 R2 = 0,9999 Corteza de raíz acuoso 4.6421a 0.2716a etOH 4.1163b 0.2166b Corteza de Tallo 4.6374a 0.2659a 3.2909c 0.1683c hojas 1.9208d 0.107d 1.7055d 0.1047d Leyenda: valores en mg / mL. (-) de Acido Gálico equivalente (EAG) y Acriflavina (EA) equivalente en extractos de Spondias mombin.

CONCLUSIONES Los extractos acuosos y alcohólicos de hojas y el acuoso de la corteza de raíz mostraron actividad antibacteriana frente a las bacterias Gram Positivas (Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis) y Gram Negativas (Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli) ensayadas. No mostraron actividad frente a la levadura C. albicans. Los extractos acuosos y alcohólicos de hojas y el extracto acuoso de corteza de raíz no mostraron diferencias significativas entre ellos y ni con el control + (Ciprofloxacina 5µg para las bacterias por lo que se considera que la acción antimicrobiana de la corteza de raíz es similar a las hojas y al antibiótico de referencia, los extractos de la corteza de tallo no mostraron actividad frente a los microorganismos utilizados. Las menores Concentración Mínima Inhibitoria y Mínima Bactericida se obtuvieron para el extracto alcohólico de hojas con valores de 0,004 mg/mL y 0,039 respectivamente para Enterococcus faecalis mientras que para Pseudomonas aeruginosa fueron 0,009 mg/mL de CMI y 0,019 mg/mL para la CMB. Los órganos que mayores concentraciones de compuestos fenólicos presentaron fueron la corteza de tallo y de raíz.