PRUEBA DE LA ANTIGLOBULINA DE COOMBS 1065 Inmunologia Aplicada. Enseñanza Experimental. Dra Ana Esther Aguilar Cárdenas

PRUEBA DE LA ANTIGLOBULINA DE COOMBS PRUEBA DIRECTA Paquete de eritrocitos lavados, preparar suspensión al 2% en medio salino. Lavar paquete celular con SSI del paciente, del testigo(+) y del testigo(-) Obtener paquete celular de la muestra por centrifugación. Coombs autotestigo Coombs directa Coombs testigo positivo Coombs testigo negativo Eritrocitos del paciente en su propio plasma 2 gotas suspensión al 2% eritrocitos del paciente y 2 gotas de suero de Coombs 2 gotas de la suspensión al 2% eritrocitos sensibilizados con IgG anti D y 2 gotas de suero de Coombs 2 gotas de la suspensión al 2% de eritrocitos no sensibilizados con anticuerpo y 2 gotas de suero Coombs Agitar tubos, centrifugar a 1000 rpm 1 minuto. Realizar lectura resuspendiendo el botón celular. Los resultados de los tubos testigos validan la prueba. Reacción de aglutinación demuestra la presencia de anticuerpos unidos a las determinantes antigénicas de los eritrocitos

PRUEBA DE LA ANTIGLOBULINA DE COOMBS PRUEBA INDIRECTA Obtener plasma o suero de la muestra por centrifugación Coombs indirecta Coombs testigo positivo Coombs testigo negativo 2 gotas de suero del paciente y 2 gotas de suspensión al 5% de GRO y con el fenotipo del grupo del sistema sanguíneo que reconoce el anticuerpo que se investiga 2 gotas de la suspensión al 2% de eritrocitos sensibilizados con IgG 2 gotas de la suspensión al 2% de eritrocitos sin sensibilizar con anticuerpo 2 gotas de suero de Coombs Agitar c/ tubo suavemente centrifugar a 1000 rpm. 1 minuto Reacción de aglutinación demuestra la presencia de anticuerpos que reconocen las determinantes antigénicas de los eritrocitos Si no se observa incubar 37° C durante 30 minutos Lavar con SSI a 2500 rpm, 5 minutos. Después del último lavado retirar sobrenadante y resuspender en SSI remanente Realizar lectura resuspendiendo el botón celular. Reacción de aglutinación demuestra la existencia en el paciente de anticuerpos que reconocen los antígenos presentes en los eritrocitos Realizar lectura resuspendiendo el botón celular PRUEBA DE LA ANTIGLOBULINA DE COOMBS + Agitar tubo, centrifugar a 1000 rpm. 1 minuto