José Enrique O’Connor Blasco Doctor en Farmacia Catedrático Acreditado Universidad de Valencia: Dpto. de Bioquímica y B.M. Centro de Citometría y Citómica Centro de Investigación Príncipe Felipe: - Laboratorio de Citómica Lecciones y Seminarios: www.uv.es/~oconnor/medicina Tutorias electrónicas y cita previa: jose.e.oconnor@uv.es

INTRODUCCION AL LABORATORIO DE PRÁCTICAS DE BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR

PROGRAMA DE PRACTICAS Cuatrimestre 1 Cuatrimestre 2 1. Introducción al Laboratorio de Bioquímica 2. Introducción a la Espectrofotometría 3. Cromatografía 4. Electroforesis 5. Técnicas de Biología Molecular 6. Introducción a la Enzimología Integración de Técnicas Bioquímicas Cuatrimestre 1 Enzimología Clínica Estudio del Metabolismo Nitrogenado Estudio del Metabolismo Lipídico Introducción a la Nutrición (Aula Informática) Estudio del Metabolismo del Glucógeno in vivo Introducción a las Técnicas Inmunológicas Integración de Bioquímica Clínica Cuatrimestre 2

CUADERNOS DE PRACTICAS Para cada práctica se edita un cuaderno: Objetivo de la práctica Fundamento de la práctica Descripción del procedimiento preparativo Descripción del procedimiento de análisis Descripción del análisis de resultados Cuestiones sobre la práctica El cuaderno es obligatorio y puede ser revisado por los profesores en cualquier momento Se deposita con antelación a las prácticas en el Servicio de Reprografía de la Facultad

NORMAS DE COMPORTAMIENTO Y DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

Información = Seguridad

MEDIDAS BÁSICAS DE SEGURIDAD: La estancia en el laboratorio, de cualquier tipo, exige conocer una serie de medidas básicas de seguridad. El laboratorio de prácticas es un lugar seguro si se cumplen las normas elementales de comportamiento y las medidas básicas de seguridad. No está permitido realizar ninguna actividad en el laboratorio no autorizada por los profesores MEDIDAS ESPECÍFICAS DE SEGURIDAD: Las operaciones que se realizan en algunas prácticas requieren información específica de seguridad. Las instrucciones son dadas por el profesor y se recogen en el cuaderno de la práctica. Se les debe prestar especial atención y cualquier duda se debe consultar con los profesores

DISPOSITIVOS DE SEGURIDAD MÁS PRÓXIMOS: Incluyen extintores, duchas de seguridad, lavaojos, mantas antifuego, etc. Hay que localizar los más próximos e informarse sobre su funcionamiento. ETIQUETAS DE SEGURIDAD: Las botellas de reactivos y algunos aparatos suelen mostrar iconos y frases que informan sobre: Posible peligrosidad y uso correcto Medidas a tomar en caso de problema derivado Hay que conocer el significado de los iconos. Se debe leer detenidamente la información y tener en cuenta las especificaciones que señalan.

Medidas de Protección

PROTECCION OCULAR Los ojos son particularmente susceptibles de daño permanente por productos corrosivos así como por salpicaduras de partículas. Es obligatorio usar gafas de seguridad en un laboratorio donde los ojos puedan ser dañados. Se recomienda no llevar lentes de contacto en el laboratorio, ya que en caso de accidente, las salpicaduras de productos químicos o sus vapores pueden pasar detrás de las lentes y provocar lesiones en los ojos.

PROTECCION CORPORAL El uso de bata es obligatorio, ya que las salpicaduras de productos químicos son frecuentes. La bata será preferentemente de algodón, ya que, en caso de accidente, otros tejidos pueden adherirse a la piel, aumentando el daño. Se recomienda llevar zapatos cerrados y no sandalias. Los cabellos largos suponen un riesgo que puede evitarse recogiéndolos en una cola o trenza.

PROTECCION DE LAS MANOS Es recomendable usar guantes, sobre todo cuando se utilizan sustancias corrosivas o tóxicas. Suelen ser recomendables los guantes de un solo uso.

Normas de Comportamiento

NORMAS HIGIÉNICAS No comer, beber ni fumar en el laboratorio, ya que los alimentos, bebidas y tabaco pueden contaminarse y contaminar. Lavarse siempre las manos después de hacer un experimento y antes de salir del laboratorio. No inhalar, probar u oler productos químicos si no se está debidamente informado. Nunca acercar la nariz para inhalar directamente de un tubo de ensayo o recipiente con líquido.

ORDEN Y LIMPIEZA Mantener el área de trabajo sin libros, abrigos, bolsas y objetos innecesarios. Mantener las mesas siempre limpias. Se tienen que limpiar inmediatamente todos los productos químicos derramados. Limpiar siempre perfectamente el material y aparatos después de su uso.

ACTUACIÓN RESPONSABLE Cada alumno es responsable de su sitio de trabajo durante su estancia en el laboratorio. Cada grupo debe encargarse de recoger el material, eliminar los resíduos y dejar perfectamente ordenada la mesa de laboratorio. Trabajar sin precipitación, pensando en cada momento lo que se está haciendo, y con el material y reactivos ordenados. No se debe gastar bromas, correr, jugar, empujar, etc. en el laboratorio. Un comportamiento irresponsable puede ser motivo de expulsión inmediata del laboratorio y sanción académica.

ATENCIÓN A LO DESCONOCIDO Comprobar el nombre de productos y diluciones antes de utilizarlos. No utilizar ni limpiar ningún frasco de reactivos que no tenga etiqueta. Entregarlo inmediatamente al profesor. No sustituir nunca, sin autorización previa del profesor, un producto químico por otro en un experimento. No utilizar nunca un equipo o aparato sin conocer su funcionamiento. En caso de duda, preguntar siempre a los profesores

Precauciones específicas en el Laboratorio de Prácticas

MANEJO DE MATERIAL DE VIDRIO Muchos accidentes de laboratorio se producen por cortes y quemaduras con vidrio. No forzar los tubos de vidrio, ya que, en caso de rotura, los cortes pueden ser graves. El vidrio caliente debe de dejarse apartado encima de una plancha o similar hasta que se enfríe. En caso de duda, usar unas pinzas o tenazas. No usar nunca matrial de vidrio que esté agrietado o roto. Depositar el material de vidrio roto en un contenedor para vidrio, no en una papelera.

MANEJO DE PRODUCTOS QUIMICOS Los productos químicos pueden ser peligrosos por sus propiedades tóxicas, corrosivas, inflamables o explosivas. Muchos reactivos, particularmente los disolventes orgánicos (etanol,metanol, acetona, cloroformo,etc.) arden en presencia de una llama. Otros pueden descomponerse explosivamente con el calor. Si se usa una fuente intensa de calor, alejar de ella los frascos de reactivos químicos. No calentar nunca líquidos inflamables con un mechero.

MANEJO DE PRODUCTOS QUIMICOS No inhalar los vapores de productos químicos. Si se produjera una concentración excesiva de vapores en el laboratorio, abrir inmediatamente las ventanas. En pipetas de vidrio o plástico, pipetear con el índice nunca con el pulgar. No pipetear directamente del frasco con agua destilada o de las disoluciones (se debe de trasvasar a un vaso de precipitados o a un tubo de ensayo, y de aquí utilizarla). En caso ácidos, alcalis, disolventes orgánicos y tóxicos, nunca con la boca, utilizar la ayuda de propipetas.

MANEJO DE PRODUCTOS QUIMICOS Un posible peligro de intoxicación es a través de la piel. Evitar el contacto de productos químicos con la piel, especialmente los tóxicos o corrosivos (ácidos y bases), usando guantes. Lavarse las manos a menudo.

MANEJO DE PRODUCTOS QUIMICOS No transportar innecesariamente los reactivos de un sitio a otro del laboratorio. Las botellas se transportan siempre cogiéndolas por el fondo, nunca del tapón.

RIESGO DE QUEMADURAS Surge del uso de fuentes de calor en reacciones químicas o preparación de materiales (por ejemplo, fusión de agar). Cuidado al manipular superficies calientes de los equipos, al contacto o manejo de tubos y recipientes calentados o a las salpicaduras. Comprobar la temperatura siempre y utilizar pinzas, paños, guantes protectores. No dejar caer los recipientes o desplazar líquido. No calentar nunca un recipiente totalmente cerrado. Dirigir siempre la boca del recipiente en dirección contraria a sí mismo y a las demás personas cercanas.

RIESGO DE ELECTROCUCION Surge por el uso de campos eléctricos intensos (fuentes alimentación para electroforesis) o por contacto de un aparato eléctrico con el agua (incluso con voltaje bajo). Hay que seguir las instrucciones de funcionamiento y manipulación de los equipos. Evitar manipular líquidos en la proximidad de instrumentos eléctricos y tener precaución con los baños termostatizados. No enchufar nunca un equipo con los cables o conexiones en mal estado. Nunca manipular en el interior de un aparato, ni siquiera desconectado de su fuente de alimentación.

RIESGO DE CONTAMINACION BIOLOGICA Surge de la utilización de: material clínico humano (virus o bacterias) o lineas celulares tumorales de origen humano (peligro de desarrollarse). El riesgo acentúa con el pipeteo con la boca, presencia de heridas en la piel y mucosas y contaminación de las manos. Si es necesario, utilizar pipetas automáticas, mascarilla y guantes.

EN CASO DE ACCIDENTE, AVISAR INMEDIATAMENTE AL PROFESOR.

Quemaduras Las pequeñas quemaduras producidas por material caliente, baños termostatizados, hornillos o placas etc., se tratan lavando la zona afectada con agua fría durante 10-15 minutos. Las quemaduras más graves requieren atención médica inmediata.

CORTES Los cortes producidos por la rotura de material de cristal son un riesgo común en el laboratorio. Estos cortes se tienen que lavar bien, con abundante agua corriente, durante 10 minutos como mínimo. Si son pequeños y dejan de sangrar en poco tiempo, lavarlos con agua y jabón y taparlos con una venda o apósito adecuados. Si son grandes y no paran de sangrar, requieren asistencia médica inmediata.

DERRAME DE PRODUCTOS QUÍMICOS SOBRE LA PIEL Los productos químicos que se hayan vertido sobre la piel han de ser lavados inmediatamente con agua corriente abundante, como mínimo durante 15 minutos. La rapidez en el lavado es muy importante para reducir la gravedad y la extensión de la herida. Proporcionar asistencia médica a la persona afectada.

Derrame de ácidos sobre la piel Cortar lo más rápidamente posible la ropa. Lavar con agua corriente abundante la zona afectada. Neutralizar la acidez con bicarbonato sódico durante 15-20 minutos. Retirar el exceso de pasta formada, seca y cubrir la parte afectada con linimento óleo-calcareo o producto similar.

Derrame de álcalis sobre la piel Lavar la zona afectada con agua corriente abundante Aclararla con una disolución saturada de ácido bórico o con una disolución de ácido acético al 1%. Secar y cubrir la zona afectada con una pomada de ácido tánico.

En caso de producirse corrosiones en los ojos En este caso el tiempo es esencial (menos de 10 segundos). Cuanto antes se lave el ojo, menos grave será el daño producido. Lavar los dos ojos con agua corriente abundante durante 15 minutos como mínimo en una ducha de ojos o con un frasco para lavar los ojos. Es necesario mantener los ojos abiertos con la ayuda de los dedos para facilitar el lavado debajo de los párpados. Es necesario recibir asistencia médica, por pequeña que parezca la lesión.

INGESTIÓN DE PRODUCTOS QUÍMICOS Antes de cualquier actuación concreta pedir asistencia médica. Si el sujeto está inconsciente, ponerlo en posición inclinada, con la cabeza de lado, y colocar su lengua hacia fuera. Si está consciente, mantenerlo levantado y procurar que no tenga frío. No dejarlo sólo en ningún momento. No provocar el vómito si el producto ingerido es corrosivo.

INHALACIÓN DE PRODUCTOS QUÍMICOS Conducir inmediatamente la persona afectada a un sitio con aire fresco. Requerir asistencia médica lo antes posible. Al primer síntoma de dificultad respiratoria, iniciar la respiración artificial boca a boca.

EN CASO DE ACCIDENTE ELÉCTRICO Apartarse inmediatamente del equipo eléctrico sobre todo si se ha producido vertido de liquido en su proximidad. En caso de descarga eléctrica, evitar tocar a quien la está sufriendo e intentar desconectar el equipo (sin riesgo). Si no se puede, desconectar la corriente general. En último caso apartarlo con un palo de madera. Requerir asistencia médica lo antes posible.

FUEGO EN EL LABORATORIO Evacuar el laboratorio, por pequeño que sea el fuego, por la salida principal o por la salida de emergencia si no es posible por la principal. Avisar a todos los compañeros de trabajo sin que se extienda el pánico y conservando siempre la calma. Si el fuego es pequeño y localizado, apagarlo utilizando un extintor adecuado, arena, o cubriendo el fuego con un recipiente de tamaño adecuado que lo ahogue. Retirar los productos químicos inflamables que estén cerca del fuego. No utilizar nunca agua para extinguir un fuego provocado por la inflamación de un disolvente.

FUEGO EN EL CUERPO Si se incendia la ropa, gritar inmediatamente para pedir ayuda. Estirarse en el suelo y rodar sobre si mismo para apagar las llamas. No utilizar nunca un extintor sobre una persona. Cubrirla con una manta antifuego y hacerle rodar por el suelo. Una vez apagado el fuego, mantener a la persona tendida, procurando que no se enfríe y proporcionarle asistencia médica.