Bacilos Gramnegativos Fermentadores de Glucosa Objetivo Conocer las principales características biológicas de los bacilos gramnegativos, su capacidad para producir infecciones, las posibilidades diagnósticas y las medidas profilácticas

Taxonomía Familia Enterobacteriaceae Géneros Especies Escherichia E. coli Shigella S. flexneri, S. sonnei, S. boydii, S. dysenteriae Salmonella S. enterica, S. bongori Klebsiella K. pneumoniae, K. oxytoca Enterobacter E. cloacae, E. aerogenes, E. agglomerans Serratia S. marcescens, S. odorifera, S. fonticola Citrobacter C. freundii, C. diversus Proteus P. vulgaris, P. mirabilis Yersinia Y. enterocolítica, Y. pestis y 20 más

Familia Enterobacteriaceae Bacilos gramnegativos Anaerobios facultativos No esporulados Catalasa positiva Fermentadores de glucosa Oxidasa negativa Reductores de nitratos a nitritos Móviles, las que lo son, mediante flagelos peritricos. Se los encuentra en el suelo, el agua, animales y plantas. Pueden formar parte de la flora normal y ser patógenos.

Enterobacterias - Determinantes antigénicos Antígeno O (somático): se encuentra en la pared bacteriana. Permite clasificarlas en serotipos O. Son polisacáridos. Antígeno H (flagelar): sólo presente en especies móviles. Permite clasificarlas en serotipos H. Son proteínas. Antígeno K (capsular): sólo presente en especies capsuladas. Permite clasificarlas en serotipos K. Son polisacáridos. Antígeno F (fimbrial): presente en algunas bacterias fimbriadas. Son proteínas. Antígeno Vi (superficie): presente en algunas especies. Su conocimiento tiene aplicación en la tipificación con fines diagnósticos (identificación serológica) y epidemiológicos.

Enterobacterias - Factores de patogenicidad Cápsula: es adhesiva y es antifagocitaria. Fimbrias: permiten la adherencia a la célula huésped. Exoenzimas: ureasa, gelatinasa, lipasa, desoxirribonucleasa. Aerobactinas: permiten la captación de hierro desde el medio. Endotoxina: LPS de pared, se libera al destruirse la bacteria. Exotoxinas: no todas las especies las producen. Sólo son producidas por las patógenas obligadas.

Enterobacterias - Patógenos oportunistas Géneros: Escherichia, Klebsiella, Serratia, Enterobacter, Citrobacter, Proteus, Morganella, Providencia, etc. Forman parte de la flora normal del hombre y los animales, están presentes en el suelo, el agua y las plantas. Producen infección cuando salen de su hábitat o hay alteraciones de las defensas locales. Producen infecciones extraintestinales como ser: infecciones urinarias, sepsis, meningitis, abscesos, neumonías, otitis, sinusitis, meningitis, etc.

Enterobacterias oportunistas Diagnóstico de laboratorio Orina, sangre, punción de heridas y abscesos, esputos, etc. Examen en fresco y Coloración de Gram Siembra en Agar E.M.B. o Mac Conkey y Agar sangre Incubar 24 hs a 37ºC Coloración de Gram y estudio de colonias Pruebas bioquímicas Antibiograma

Diferenciación BGN OF Fermentadores (ambos tubos viran al amarillo) (Oxidación-fermentación) Fermentadores (ambos tubos viran al amarillo) Oxidativo o Inertes (vira el tubo expuesto al 02, o no vira ninguno, respectivamente) Bacilos Gram (-) fermentadores de la glu Enterobacterias Vibrio Aeromonas no fermentadores de la glu Pseudomonas Acinetobacter Moraxella Alcalígenes Burkholderia Stenotrophomonas

Diferenciación BGNFG Oxidasa (+) (-) Vibrio Aeromonas Enterobacterias

Enterobacterias - Diagnóstico de laboratorio Citrato Urea Ox Oxidasa SH2 Agar Mac Conkey Triple azúcar hierro (TSI)

Enterobacterias oportunistas Diagnóstico de laboratorio Otras pruebas: producción de indol, descarboxilasas, rojo de metilo, DNAsa, Voges-Proskauer, fermentación de azúcares, etc.

Enterobacterias Patógenos Obligados Géneros: Escherichia, Shigella, Salmonella, Yersinia No forman parte de la flora normal y su presencia en la muestra es indicativa de infección. Se transmiten de hombre a hombre por vía ano-mano-boca o se adquieren a partir de aguas y alimentos contaminados. Producen infecciones intestinales excepto Salmonella que puede producir sepsis, neumonías, etc. Son la primer causa de muerte de etiología infecciosa en niños de países subdesarrollados.

E. coli diarreogénicas Existen 6 virotipos o patotipos E. coli enteropatógena E. coli enteroinvasiva E. coli enterohemorrágica E. coli enterotoxigénica E. coli enteroadherente E. coli enteroagregativa Aunque hay diferencias antigénicas, pueden compartir antígenos somáticos Producen diarrea relacionada con la ingestión de alimentos contaminados con materia fecal, variando de acuosas a disentéricas.

Patogénesis

Shigella 4 especies pertenecientes a 4 grupos serológicos O: A S. dysenteriae B S. flexneri C S. boydii D S. sonnei Las especies más frecuentes en nuestro país son S. flexneri (85%) y S. sonnei (15%) Son todas inmóviles

Patogénesis

Salmonella 2 especies: S. bongori y S. enterica 6 subespecies de S. enterica: S. enterica, S. salamae, S. arizonae S. houtenae, S. diarizonae, S. indica Más de 2500 serotipos según sus antígenos O, H y Vi. La mayoría de las especies son móviles Producen diarrea relacionada con la ingestión de alimentos contaminados con materia fecal, pudiendo dar complicaciones como sepsis, neumonías, abscesos, etc. Salmonella Typhi produce fiebre tifoidea.

Patogénesis

Enterobacterias diarreogénicas Diagnóstico de laboratorio Materia fecal Examen en fresco y Coloración de Gram Siembra en Agar E.M.B. o Mac Conkey y Agar SS Incubar 24 hs a 37ºC Pruebas bioquímicas Identificación serológica Antibiograma

Protocolo mínimo Rutina ® Salmonella y Shigella Heces sanguinolentas ® + ECEH Inmunocomprometido ® + Cryptosporidium

Siembra inicial-Aislamiento primario Medios poco selectivos Medios selectivos Medios de enriquecimiento 18 hs

Siembra Inicial Agar Eosina Azul de Metileno Agar Mac Conkey Agar Salmonella Shigella Agar XLD Agar Verde Brillante Bilis Agar Hektoen Enterico Medios cromogénicos Agar Mac Conkey Sorbitol Caldo Selenito Caldo Tetrationato Caldo Rappaport-Vassiliadis Caldo Bolton Agua peptonada alcalina

Caldos de enriquecimiento Salmonella: Selenito o rappaport Vasiliadis E. coli O157: Agua peptonada +TEL + CFX

EMB Agar Mac Conkey

Agar Salmonella Shigella

Agar XLD Agar Hektoen Enterico

CHROMagar E. coli 0157 CHROMagar Salmonella 0157

Identificación inicial ATS SF SIM LDC FEA ONPG Colonias sospechosas

Identificación definitiva ATS TSI URE ODC ADH OXI CIT DNAsa

Enterobacterias diarreogénicas Diagnóstico de laboratorio Otras pruebas: producción de indol, descarboxilasas, rojo de metilo, acetato, Voges-Proskauer, fermentación de azúcares, etc.

ONPG (-) (+) Fenilalanina

SIM Lisina Decarboxilasa Citrato/Acetato SH2- Ind+ Mot+ SH2+ Ind+ Mot+

Triple Azúcar Hierro Ureasa Positivo Negativo

Lisina Hierro Agar LIA – SH2 - LIA + SH2 - LIA + SH2 -

Serotipos Salmonella Identificación serológica Serovariedad o serotipo Chaco Corrientes TOTAL n % S. Newport 4 57 61 35,5 S. Enteritidis 10 34 44 25,5 S. Infantis 27 8 35 20,3 S. Typhimurium 7 2 9 5,2 Otros 16 23 13.5 Total 55 117 172 100

Antibiograma Acido nalidíxico Ampicilina Ampicilina/sulbactama Trimetoprima/sulfametoxazol Cefalosporinas de 3ra generación Ciprofloxacina

Prevención de las diarreas Uso de agua potable para beber Provisión de agua para higiene Higiene personal Higiene de los alimentos Adecuada disposición de excretas Adecuada conservación de los alimentos

Medidas de control 1) calentar el alimento hasta alcanzar temperatura suficiente para eliminar a las bacterias, de 65 a 74°C 2) conservar el alimento a temperaturas menores de 5°C 3) prevenir la contaminación cruzada después del tratamiento térmico y 4) evitar que las personas con síntomas de gastroenteritis o portadores, manipulen alimentos.

Recordar:¡En unas pocas horas, los gérmenes se pueden multiplicar en millones¡