MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD TEMA 6. METODOLOGIA DE MUESTREO Y ANÁLISIS DE RESIDUOS DE PLAGUICIDAS Introducción Muestreo Análisis de las muestras Preparación Extracción Determinación y Cuantificación

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD El uso masivo de plaguicidas y los consecuentes riesgos para la salud y el medio ambiente son las causas por las cuales el análisis de residuos de plaguicidas es uno de los campos de interés de la Química Analítica. Las diferentes Administraciones disponen para su control una amplia gama de estrategias de inspección concebidas como único objetivo: Controlar el posible mal uso y que puede dar lugar a residuos ilegales Detectar problemas

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD Problemática de este tipo de analíticas Muestreo Diversidad y complejidad de las muestras o matrices Bajas concentraciones (plaguicidas,metabolitos y productos de degradación)

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD Características de los métodos de análisis Gran selectividad sin interferir los numerosos compuestos presentes en la matriz Alta selectividad determinar niveles de trazas

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD Problemática de residuos en el olivar. Tipo de muestras: Suelo Agua Hojas Aceitunas Aceite

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD Muestras de suelo Los residuos de plaguicidas proceden de: - Aplicaciones directas (herbicidas) - Por traslación al suelo tras aplicaciones directas al árbol

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD TOMA DE MUESTRA DE SUELO No hay normativa Submuestras: número considerable para ser representativa del terreno a evaluar (75 % del error) Perfil: primeros 5 cm superficie Instrumental: (barrena, pala) Cantidad: 1 kg de tierra homogénea

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD Muestras de aguas Superficiales Subterraneas Los residuos de plaguicidas proceden de: - Fenómenos de escorrentia - Fenómenos de lixiviación - Malas prácticas agrícolas

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD TOMA DE MUESTRA DE AGUA Normativa BOE 20/1/82. Derogado pero vigente hasta que no sea oficialmente sustituido por otro

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD TOMA DE MUESTRA DE AGUA Tipos de muestras Muestras simples Tomadas en un tiempo y lugar determinado para su análisis individual Muestras compuestas Obtenidas por mezcla y homogeneización recogidas en el mismo punto y en diferentes tiempos Muestras integradas Obtenidas por mezclas de muestras simples recogidas en puntos diferentes y simultáneamente

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD TOMA DE MUESTRA DE AGUA Material y Aparatos Envases escrupulosamente limpios, de plástico o vidrio, realizándose la toma de muestra: - Directamente sobre el envase - Equipo tomamuestras - Equipo automático Volumen mínimo 500 ml, conservándose en refrigerador a 4ºC y tiempo máximo entre toma y análisis de 7 dias

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD Características básicas de las aguas El control de la calidad de las aguas prepotables corresponde al MOPU en cumplimiento de la Directiva 76/464/CEE, relativa a la contaminación causada por determinadas sustancias peligrosas vertidas en el medio acuático de la Unión Europea

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD Clasificación aguas superficiales susceptibles de ser destinadas al consumo humano, en función del tratamiento a que deben someterse antes de su distribución (Orden del 11 mayo 1988) A-1 Tratamiento físico simple y desinfección A-2 Tratamiento físico normal, tratamiento químico y desinfección A-3 Tratamiento físico y químico intensivos, afino y desinfección

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD Características básicas de las aguas (Plaguicidas) Tipo A-1 0.001 mg/l Tipo A-2 0.0025 mg/l Tipo A-3 0.005 mg/l

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD Características de las aguas potables (Plaguicidas) Reglamentación Técnico- Sanitaria para el abastecimiento y control de las aguas potables para consumo público (Real Decreto1138/1990) Plaguicidas: Individuales 0.1 ppb Totales 0.5 ppb

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD Muestras de hojas Los residuos de plaguicidas proceden de: - Aplicaciones directas (insecticidas, fungicidas) - Por deriva de otras aplicaciones - Por tras locación de plaguicidas presentes en el suelo

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD TOMA DE MUESTRA DE HOJAS No hay normativa Submuestras: número considerable para ser representativa del olivo a evaluar Distribución: tallos a la altura de los ojos y en los cuatros puntos cardinales, tan del interior como del exterior Instrumental: (tijera de podar) Cantidad: 100-200 g de tallos tras homogeneizar las submuestras

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD Muestras de aceitunas Los residuos de plaguicidas proceden de: - Aplicaciones directas (insecticidas, fungicidas) - Por deriva de otras aplicaciones indirectas - Por tras locación de plaguicidas presentes en el suelo

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD TOMA DE MUESTRA DE ACEITUNAS Real Decreto 290/2003, de 7 de marzo, por el que se establecen los métodos de muestreo para el control de residuos de plaguicidas en los productos de origen vegetal. Traspone la Directiva 79/700/CEE de la Comisión, de 24 de Julio de 1979.

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD TOMA DE MUESTRA DE ACEITUNAS Objetivo Establecer los métodos aplicables a los muestreos de productos de origen vegetal para determinar los niveles de residuos de plaguicidas de conformidad con el Real Decreto 280/94, por el que se establecen los LMRs de plaguicidas y su control en determinados productos vegetales

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD TOMA DE MUESTRA DE ACEITUNAS - El lugar de donde se tome la muestra se elegirá de preferencia en modo aleatorio, pero cuando esto se a materialmente impracticable, el lugar se elegirá al azar en las partes accesibles del lote - Instrumento de muestreo: cuchara, cazo, sonda - Naturaleza de las muestras primarias: Unidades enteras, o envasadas, o tomadas con un instrumento de muestreo - Tamaño mínimo de cada muestra de laboratorio: 1 Kg

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD TOMA DE MUESTRA DE ACEITUNAS Deberá evitarse la contaminación y deterioro de las muestras en todas las fases - Muestras primarias Muestra considerada equivalente a la muestra a granel - Muestra de laboratorio Cantidad representativa del material extraído de la muestra a granel y enviada al laboratorio - Lote Cantidad de un producto entregado (remolque)

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD TOMA DE MUESTRA DE ACEITUNAS - Número mínimo de muestras primarias 1 muestra para productos envasados o a granel, que puedan considerarse bien mezclados u homogéneos 10 muestras para productos envasados o a granel, que no puedan considerarse bien mezclados u homogéneos, para un lote de peso >500 Kg

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD TOMA DE MUESTRA DE ACEITES - Naturaleza de las muestras primarias: Unidades envasadas, u otras unidades enteras, o tomadas con un instrumento de muestreo - Tamaño mínimo de cada muestra de laboratorio: 0.5 l ó 0.5 Kg

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD PREPARACION DE LAS MUESTRAS La toma de una submuestra (porción analítica)que tenga una composición representativa de toda la muestra de laboratorio es la tarea más difícil Esto requiere que la muestra de laboratorio sea picada o molturada, en la mayoría de los casos antes de mezclar y submuestrear

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS.OPERACIONES Tamizado (muestras de suelos) Filtrado (muestras de aguas) Troceado (muestras de hojas) Triturado (muestras de aceitunas) Mezclado

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS. Instrumental de laboratorio Tamizadora Equipos de filtración Troceadoras mecánicas Trituradora Batidora Molino de martillos El analista siempre debe de prevenir cambios en al muestra que puedan originar un resultado analítico sesgado

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN DE LAS MUESTRAS. Depende: Contenido en grasa Contenido en agua Contenido en azucares Todos los procesos de extracción se llevan a cabo usando disolventes (agua, metanol, acetona, acetato de etilo, éter de petróleo, diclorometano, acetonitrilo, etc), bien individualmente, o mezclas de dos o tres de ellos

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD MÉTODOS EXTRACCIÓN Específicos Ditiocarbamatos Glifosato Multiresiduos (MRM) Desarrollados para determinar de una vez un amplio rango de combinaciones de plaguicidas/matrices

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD MÉTODOS EXTRACCIÓN Esquema de un Método Multiresiduos (MRM)

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD MÉTODOS EXTRACCIÓN Métodos de extracción para matrices no grasas Métodos de extracción para matrices grasas El límite entre grasa y no grasa se ha seleccionado arbitrariamente en el 5%

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD MÉTODOS EXTRACCIÓN Métodos de extracción para matrices no grasas Acetato de etilo Acetona-partición (Luke) Acetonitrilo (QuEChERS) Actualmente se han miniaturizado, reduciendo notablemente los consumos de reactivos.

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD MÉTODOS EXTRACCIÓN Métodos de extracción para matrices grasas Éter de petróleo (40-50 mg grasa/ml) Acetona-partición (Luke) Acetonitrilo-partición

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD MÉTODOS PURIFICACIÓN Métodos de extracción para matrices grasas requieren de una etapa adicional de purificación GPC Cartuchos extracción fase sólida Partición líquido-líquido Fase sólida dispersa

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD MÉTODOS DETERMINACIÓN Y CUANTIFICACIÓN Cromatografía de gases (GC) Detectores específicos (NPD, ECD, FPD, etc) MS/MS (Quadrupolo, ITD) Cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) Detectores específicos (DAD, FLD, UVD) LC-MS

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD CONCEPTOS CROMATOGRAFICOS Ver presentación aparte

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD ANÁLISIS DE LAS MUESTRAS En tanto no se establezcan oficialmente otros métodos de análisis, se utilizarán métodos internacionales reconocidas, o aquellos validados en cada laboratorio según norma de calidad ISO 17025. Los laboratorios deben realizar autocontroles para verificar que la metodología analítica es adecuada. Los laboratorios deben participar en los ensayos colaborativos que se organicen tanto a nivel nacional como Europeo que permitan comprobar el correcto funcionamiento de los laboratorios y que sus resultados sean equiparables.

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD NORMA DE CALIDAD ISO 17025 Ver presentación aparte

MASTER OFICIAL EN OLIVAR, ACEITE DE OLIVA Y SALUD EJERCICIOS COLABORATIVOS Ver presentación aparte