Sección 4. Estructura, propiedades y función de ácidos nucleicos. Transferencia de material genético I: Conjugación.

Plásmidos Moléculas circulares de DNA extracromosómico. De doble cadena. Se pueden replicar de manera independiente al DNA cromosómico. 1-200 kb (generalmente 2-5 kb). Plásmidos

Cuentan con genes adaptativos para supervivencia en condiciones especiales. Resistencia a antibióticos. Resistencia a metales pesados. Degradación de complejos orgánicos Producción de toxinas.

Estructura básica Origen de replicación. Genes de resistencia a antibióticos. Marcadores de selección. Sitio múltiple de clonación. Estructura básica

Adquisición de plásmidos Adquisición de un plásmido por una bacteria Transferencia horizontal de material genético Transformación Transducción Conjugación Transferencia vertical de material genético

Transferencia horizontal vs. Transferencia vertical Transferencia de material genético entre individuos sin relación de parentesco. Transferencia de material genético de los progenitores a las células hijas durante la división celular.

Transformación El ADN desnudo penetra en la bacteria a través de sus poros o de una región dañada de la pared celular.

Transducción Un virus (bacteriófago) se encarga de transferir el ADN de una bacteria a otra.

Conjugación Fenómeno de recombinación. Paso de material genético de una célula a otra a través de un puente (pilis sexuales). Condición: CONTACTO CELULA-CELULA. Tipo sexual opuesto: Célula donadora: macho o F+ Célula receptora: hembra o F-

Actividad no clara de pilis sexuales. B. gramnegativas: pilis sexuales. B. grampositivas: contacto bacteria-bacteria, proteína de anclaje. Plásmidos con genes tra. Factor de fertilidad o plásmido F de E. Coli.

Plásmido F Primer plásmido que se observó que se transfería en E. coli 105 genes Capacidad de conjugarse con otra célula que no lo posea. En una sola copia por cromosoma bacteriano. Integrada se replica como parte del cromosoma bacteriano. Con más de 40 genes tra.

Células con plásmido F: F+ Células sin el plásmido F: F- Las células F+ se adhieren a las células F- por medio de los pilis y les transfieren el plásmido F a través de puentes citoplasmáticos entre células.

El factor F le confiere a las células receptoras…. Capacidad de producir pili F y de transferir el plásmido F. Las células receptoras F- se transforman en células F+.

¿Qué haremos en esta práctica? Comprobación de la conjugación bacteriana mediante la transferencia de un marcador genético, la resistencia a la kanamicina. Marcador genético de selección para la cepa receptora: resistencia a la estreptomicina.

En el tubo de 13x100 con 1 mL de caldo Luria estéril colocar: En condiciones estériles En el tubo de 13x100 con 1 mL de caldo Luria estéril colocar: 0.5 mL de cultivo de E. coli JM1452Str (cepa receptora) + 0.2 mL de E. coli W3110/F’Kmtn3 (cepa donadora) Incubar el tubo a 37°C sin agitación. Dividir una caja Petri en 3 (CAJA A) Medio Luria-agar 2% sulfato de estreptomicina. Colocar 1 gota o sembrar por estría: Zona 1. “Bacteria receptora”. Zona 2. “Conjugación”. Zona 3. “Bacteria donadora”. Incubar a 37°C por 24 h ó hasta el crecimiento en zona 2. Refrigerar a 4°C.

Testigo Dividir una caja Petri con Luria-agar 2% sulfato de estreptomicina en 2. Dividir una caja Petri con Luria-agar 2% sulfato de kanamicina en 2. Sembrar por estría las cepas donadora y receptora en cada mitad de ambas cajas. Incubar a 37°C por 24 h. Crecimiento. Refrigeración de las cajas a 4°C.

CAJA A Si se colocaron gotas: sembrar una asada en 2 diferentes caja Petri con el mismo medio: Zona 1 y Zona 2. Incubar a 37°C/24 h. Cepa receptora En una caja de Petri con Luria-agar 2%-estreptomicina: parchar 50 colonias En una caja de Petri con Luria-agar 2% sulfato de kanamicina: parchar 50 colonias Cepa transconjugante

Bibliografía Puerta, C. 2005. Prácticas de biología molecular. Bogotá. Editorial Pontificia Universidad Javeriana. 31-37 p. Riechmann, J. 2004. Transgénicos: el haz y el envés. Una perspectiva crítica. Madrid. Editorial catarata. 66 p. Tortora, G. 2009. Introducción a la microbiología. Buenos aires. 9ª edición. Editorial Médica Panamericana. 242-244 p.