Rocio Inga Peña Dpto. Bioquímica, Biol Mol & Farmacología ELECTROFORESIS DE PROTEÍNAS
Gel de apilamiento (menor concentración) Gel de separación (la concentración depende de la resolución que se busque )
DETERMINACION DEL TAMAÑO DE UNA PROTEINA PROBLEMA RF = distancia recorrida por la banda distancia total al frente de la corrida (RF)
Inicio de corrida (donde inicia el gel separador) Frente de corrida (línea donde termina el colorante)
ELECTROFORESIS BIDIMENSIONAL Separación por: Punto isoeléctrico Tamaño
Separación por Punto Isoeléctrico
Punto isoelectrico diferente pero del mismo tamaño Punto isoelectrico igual pero diferente tamaño
Análisis de Proteínas Multiméricas - Determinación de número y tamaño de subunidades
Dithiothreitol (DTT) y β -mercaptoetanol ( β ME) son agentes denaturantes
ELECTROFORESIS DE PROTEINAS EN UNA DIMENSION CONDICIONES: DENATURANTES NO-DENATURANTES PRACTICA A REALIZAR
Las muestras para analizar serán diferentes fracciones obtenidas durante la purificación de la Pirazinamidasa: Extracto inicial Fracción sin proteìna, sin actividad Fracción con proteìna, sin actividad Fracción con proteìna, con actividad
Actividad enzimáticaCantidad de Proteína (Pirazinamidasa) (Bradford)