IDENTIFICACIÓN GENÉTICA Y MORFOLÓGICA DE OLIVOS CENTENARIOS ACTUALMENTE EN PRODUCCIÓN EN EL URUGUAY En Uruguay el auge del cultivo del olivo (Olea europeae L) genera la necesidad de caracterizar las variedades implantadas históricamente en el país. Los montes centenarios constituyen un excelente punto de partida, pues se encuentran en producción a pesar de no haber sido manejados durante décadas y por lo tanto están localmente adaptados. Gándara, J 1 ; Silveira, V 1.; López, S. 1 ; Pereira, J. 1 ; Pagliano, G. 1 ; Peverelli, J. 2 1 Dpto. Biología Vegetal, Facultad de Agronomía, Universidad de la República, Montevideo-Uruguay. 2 Semillas Santa Rosa S.A., Santa Rosa, Canelones-Uruguay. INTRODUCCIÓN MATERIALES Y MÉTODOS Se colectaron 40 muestras/árbol de hoja y fruto de plantaciones centenarias en 11 sitios del sur, sureste y litoral del país. Los individuos se seleccionaron por productividad y estado fitosanitario. Se extrajo ADN genómico a partir de hojas frescas juveniles según protocolo de Ferreira & Grattapaglia (1996). Se utilizaron 10 primers de regiones microsatélites: UDO99-006, UDO99-007, UDO99-008, UDO99-009, UDO99-011, UDO99-014, UDO99-028, UDO99-031, UDO y UDO (Cipriani et al., 2002). Se tomó como estándar la variedad ‘Frantoio’ para c/uno de ellos. Se determinaron caracteres cualitativos de fruto (9 con 29 estados), endocarpo (11 con 29 estados) y hoja (2 con 13 estados). Se registraron peso de fruto y endocarpo y largo y ancho de lámina foliar en 8040 hojas adultas. Se aplicó protocolo propuesto por Barranco & Rallo (2004) para el Comité Oleícola Internacional. El procesamiento de frutos, extracción de pulpa y elección de descriptores de endocarpo se realizaron de acuerdo a Cavagnaro et al. (2004). Se corrieron los programas InfoStat 2004 (Córdoba, Arg) y Statistica versión 7.0 (Tulsa, OK, USA). Se realizaron estudios de conglomerados (distancia de Jaccard, UPGMA). Morfológicos Hoja: A partir del coeficiente largo/ancho se distinguieron variedades, incluyendo variabilidad para el estándar ‘Frantoio’. La información se obtuvo mediante el t-test for dependent samples (Fig. 6) y luego se constató a través del estudio de microsatélites. Fruto y Endocarpo: El análisis de los caracteres correspondientes mostró diferentes resultados y poder discriminante. Ambos tipos de atributos fueron variables dentro y entre sitios de colecta. No obstante, los 5 caracteres del endocarpo permitieron agrupar el material con mayor precisión en función de sitios de colecta (Fig.7 y 8). RESULTADOS Moleculares Nueve microsatélites (SSR) mostraron resultados acordes a los perfiles esperados para la variedad ‘Frantoio’, de acuerdo a Cipriani et al., (2002) (Fig. 1). Con los primers UDO y UDO se identificaron variedades a partir de estándares de cultivares certificados de reciente implantación en el país (Fig. 2 A y B). Mediante el primer UDO se observó variabilidad intrapoblacional (Fig. 3). Sin embargo, este cebador no fue suficiente para detectar polimorfismo en todas las poblaciones (Fig. 4). Además, analizando 2 muestras por localidad se observó variabilidad interpoblacional con el primer UDO (Fig. 5). CONCLUSIONES Se identificaron los cultivares ´Frantoio´, ´Arbequina´, ´ Leccino´, ´Manzanilla´, ´Pendolino´ y ´Taggiasca´. En vestigios de quintas centenarias de Montevideo predominó la variedad italiana ´Frantoio´. Posiblemente, las múltiples introducciones de material de propagación clonal (estacas) han generado la uniformidad observada en algunos sitios y evidencian la composición monovarietal de dichas plantaciones. El coeficiente largo/ancho de hoja resultó apropiado para distinguir variabilidad, lo que lo convierte en un parámetro muy útil para estudios preliminares. Los análisis de fruto y endocarpo diferenciaron muestras por sitio de colecta y variedad. El gran poder discriminante de los caracteres del endocarpo confirma su estado altamente conservado como carácter taxonómico. Es decir, se trata de atributos de alta heredabilidad poco modificados por condiciones ambientales. Objetivo Identificar ejemplares de valor agronómico mediante microsatélites (SSR) y descriptores morfológicos de hoja, fruto y endocarpo en sitios edafo-climáticos contrastantes. Fig. 4. Productos PCR con el primer UDO en población de Canelones Fig. 3. Productos PCR con el primer UDO en población de Montevideo Rural UDO UDO UDO UDO UDO UDO UDO UDO UDO Fig. 1. Productos de PCR de Var. ‘ Frantoio ’ con diferentes primers UDO99-006, 07, 08, 09, 011, 014, 028, 035, y 043). Perfil estándard. Estándar morfológico variedad ‘Frantoio’. Forma ápice Nº surcos fibrovasculares Forma base Tipo de superficie Posición del diámetro transversal máximo Fig. 8. Caracteres de mayor poder discriminante del endocarpo. Fig. 2 B. Perfil PCR con el primer UDO Variedades:1 y 2- Frantoio, 3 y 4-Taggiasca, 5 y 6-Leccino Fig. 2 A. Perfil PCR con el primer UDO Variedades: 1-Taggiasca, 2-Leccino, 3-Arbequina, 4- Manzanilla, 5-Pendolino. Taggiasca Leccino Arbequina Manzanilla Pendolino Frantoio Taggiasca Leccino Fig. 5. Productos PCR con primer UDO en 4 sitios de colecta del sur y sureste del país Sitio 1 Sitio 2 Sitio 3 Sitio 4 MUESTRAS EN PROCESAMIENTO TAGGIASCA MANZANILLA ARBEQUINA PENDOLINO LECCINO FRANTOIO PENDOLINO Distancia de Jaccard Fig. 7. Estudios de conglomerados ( UPGMA) para los 5 caracteres de endocarpo. Fig. 6. Coeficiente largo/ancho foliar para 11 sitios de colecta y 6 variedades patrón certificadas. Variedades certificadas de referencia Frantoio BIBLIOGRAFÍA BARRANCO, D. Y L. RALLO El Cultivo del Olivo. Mundi Prensa-Junta de Andalucía. 800 pp. España. Pp CIPRIANI, G; MARRAZZO, M.T; MARCONI, R; CIMATO, A. & R. TESTOLIN Isolation and characterization of microsattellite in olive (Olea europeae L). Theor Appl Genet 104:223–228. FERREIRA, M.E. & D. GRATTAPAGLIA EMBRAPA-CENARGEN, 2da. Ed. pp CAVAGNARO, P.; BAUZÁ, M.; JUÁREZ, J.; MASUELLI, W Discriminación de variedades de olivo a través caracteres morfológicos y de marcadores moleculares. AgriScientia. CONSEJO OLEÍCOLA INTERNACIONAL Metodología de caracterización primaria y secundaria. In: proyecto sobre conservación, caracterización, recolección y utilización de los recursos genéticos del olivo (RESGEN-CT 96/97). On line: http//: