UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA Métodos y Técnicas de Estudio en Biología Celular
UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA Inmunoblotting (western blot), Dot/slot blot Inmunocitoquímica Inmunofluorescencia Inmunoprecipitación ELISA/EIA/RIA Cromatografía de inmunoafinidad Microscopia electrónica (morfología)
Estructura de los anticuerpos
Tipos de Anticuerpos
Selección clonal: Delección
Selección clonal: expansión
Conceptos Conceptos Inmunógeno, antígeno. Carrier: BSA, KLH. Unión covalente (cross-linking): MBS, glutaraldehido, DSS. Péptidos inmunogénicos Proteínas nativas y desnaruralizadas. Otras moléculas Adjuvante de Freund: completo e incompleto. Primera inmunización y recuerdos.
Anticuerpos policlonales Inmunización del conejo Recuerdos Extracción de sangre Preparación del suero Purificación del anticuerpo (métodos opcionales) Caracterización del antisuero
Anticuerpos policlonales
Anticuerpos monoclonales Inmunización del ratón Extracción del bazo Preparación de hibridomas (mieloma+B) Selección de los clones Producción y uso de anticuerpos
Elección del tipo de anticuerpo
Marcaje de Anticuerpos
Marcaje de Anticuerpos para uso en Células
Immunoblotting (western blot) Immunoblotting (western blot)
Inmunocitoquímica Las flechas indican la presencia de neuronas con hormona liberadora de la hormona del crecimiento en el Núcleo Arcuato (cerebro) de rata de 4 meses.
Inmunocitoquímica Localización de la “calbinding” (calbindina) en cerebelo de rata
Microscopia (confocal e inmunofluorescencia)
Inmunoprecipitación
Inmunoprecipitación
ELISA
ELISA
Cromatografía de inmunoafinidad
Oro Coloidal Internalización de transferrina marcada con oro coloidal (6,6 nm) en células endoteliales. La barra corresponde a 0,25 mM.
Oro Coloidal Internalización de transferrina marcada con oro coloidal (6,6 nm). G: aparato de Golgi; Lu: lumen vascularLa barra corresponde a 0,25 mM.