UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA

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Transcripción de la presentación:

UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA Métodos y Técnicas de Estudio en Biología Celular

UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA Inmunoblotting (western blot), Dot/slot blot Inmunocitoquímica Inmunofluorescencia Inmunoprecipitación ELISA/EIA/RIA Cromatografía de inmunoafinidad Microscopia electrónica (morfología)

Estructura de los anticuerpos

Tipos de Anticuerpos

Selección clonal: Delección

Selección clonal: expansión

Conceptos Conceptos Inmunógeno, antígeno. Carrier: BSA, KLH. Unión covalente (cross-linking): MBS, glutaraldehido, DSS. Péptidos inmunogénicos Proteínas nativas y desnaruralizadas. Otras moléculas Adjuvante de Freund: completo e incompleto. Primera inmunización y recuerdos.

Anticuerpos policlonales Inmunización del conejo Recuerdos Extracción de sangre Preparación del suero Purificación del anticuerpo (métodos opcionales) Caracterización del antisuero

Anticuerpos policlonales

Anticuerpos monoclonales Inmunización del ratón Extracción del bazo Preparación de hibridomas (mieloma+B) Selección de los clones Producción y uso de anticuerpos

Elección del tipo de anticuerpo

Marcaje de Anticuerpos

Marcaje de Anticuerpos para uso en Células

Immunoblotting (western blot) Immunoblotting (western blot)

Inmunocitoquímica Las flechas indican la presencia de neuronas con hormona liberadora de la hormona del crecimiento en el Núcleo Arcuato (cerebro) de rata de 4 meses.

Inmunocitoquímica Localización de la “calbinding” (calbindina) en cerebelo de rata

Microscopia (confocal e inmunofluorescencia)

Inmunoprecipitación

Inmunoprecipitación

ELISA

ELISA

Cromatografía de inmunoafinidad

Oro Coloidal Internalización de transferrina marcada con oro coloidal (6,6 nm) en células endoteliales. La barra corresponde a 0,25 mM.

Oro Coloidal Internalización de transferrina marcada con oro coloidal (6,6 nm). G: aparato de Golgi; Lu: lumen vascularLa barra corresponde a 0,25 mM.