Cromatografía de reparto o de partición

La cromatografía de reparto consiste en la separación de los componentes de una mezcla sobre una fase estacionaria constituida por un soporte sólido inerte cubierto por una película líquida que es fuertemente retenida por dicha fase. La separación se efectúa por medio de una fase fluida móvil que es el solvente de desarrollo que es inmiscible con el líquido del soporte estacionario y que transporta los componentes a lo largo de la F. E.

Los componentes se van separando según sean sus solubilidades relativas en el líquido de la fase estacionaria y la fase móvil. Se define entonces el coeficiente de reparto o constante de distribución como el cuociente de la concentración del soluto en la fase móvil y su concentración en la fase estacionaria: Kd = CM / CE

Aquellas sustancias que presentan un alto valor de Kd son movilizadas más rápidamente que aquellas que tienen un bajo valor de Kd. Así en la cromatografía de reparto los solutos se van separando secuencialmente, de acuerdo con sus respectivos valores de Kd.

Fases estacionarias Como ya se ha señalado, la fase estacionaria está constituida por un soporte sólido y un líquido fuertemente retenido que lo recubre superficialmente. Este líquido habitualmente es agua, pero también puede ser de naturaleza orgánica, cuando el solvente es polar.

Diversas sustancias pueden ser utilizadas como fases sólidas según cómo retengan el agua ( líquido polar). Fases sólidas que retienen el agua por adsorción: sílica gel desactivada y tierra de diatomeas también desactivada con agua. Fases sólidas que retienen el agua por formación de puentes de hidrógeno: papel cromatográfico y celulosa en polvo.

Solventes de desarrollo o fase móvil En la cromatografía de reparto, la capacidad transportadora de un solvente puede evaluarse a través de su capacidad para formar puentes de hidrógeno con el agua del soporte estacionario. Así se habla de eluyentes hidrófilos e hidrófobos.

Eluyentes mas usuales ordenados de acuerdo a su carácter hidrofílico decreciente Formalina – metanol – ácido acético – etanol isopropanol – acetona – n propanol – terbutanol n butanol – alcohol n amílico – acetato de etilo éter etílico – acetato de n butilo – cloroformo benceno – tolueno- ciclohexano – éter de petróleo.

Para el desarrollo del cromatograma debe elegirse el solvente menos hidrófilo posible que permita el desplazamiento. Se deduce que los analitos (solutos) tardan más tiempo en eluirse si se usa una fase móvil poco polar. Es decir, cuanto más polar sea el analito, más tardará en eluir.

La cromatografía de reparto se divide en “fase normal”, y “fase reversa”, cuyas principales diferencias radican en las distintas polaridades de sus fases estacionarias y móviles.

Cromatografía en fase normal En este caso la fase estacionaria es polar y la móvil apolar. La retención tiene lugar en esa especie de capa líquida depositada en la fase estacionaria (polar) y la fase móvil (apolar). Donde el analito menos polar será el primero que se eluye y el más polar el último en eluir.

Cromatografía en fase reversa En la cromatografía de fase reversa su fase estacionaria en apolar, y la fase móvil polar. La retención se produce en esta especie de capa líquida depositada químicamente como consecuencia de la distinta solubilidad relativa entre la fase estacionaria (apolar) y la fase móvil (polar).

Los compuestos más retenidos son los más apolares. La retención y selectividad se controlan fundamentalmente con la composición de la fase móvil. Para obtener una fase móvil de fuerza de elución óptima, se ensayan mezclas de metanol, acetonitrilo o tetrahidrofurano en agua.

Actualmente, el 75% de los análisis con HPLC (cromatografía líquida de alta resolución) se realizan en fase reversa. Permite un análisis directo de muestras acuosas y de compuestos solubles en agua o en disolventes relativamente polares (metanol) y con peso molecular no superior a 2000 o 3000 uma.

Aplicaciones de la Cromatografía de Reparto en productos alimenticios edulcorantes artificiales, antioxidantes, aflatoxinas, aditivos en bebidas refrescantes, colorantes, aminoácidos, proteínas, carbohidratos, lípidos

CUESTIONARIO Completa la siguiente tabla comparativa con los parámetros que se indican a continuación: Tipo de cromatografía Indicadores Cr. de adsorción Cr. de reparto Fase Estacionaria. Fase Móvil Separación solutos Interacción FM -FE Tipo interacción Soluto - FM

Enumera los requisitos de un adsorbente. 2. ¿De qué depende la separación en la cromatografía de adsorción? Enumera los requisitos de un adsorbente. ¿Cómo se clasifican los adsorbentes de acuerdo a su capacidad de retención de los solutos? ¿Cómo se clasifican las fases estacionarias en la cr. de reparto de acuerdo a su capacidad de retención de los solutos? ¿En qué consiste la activación de los adsorbentes y qué intención tiene su activación?

Al realizar una cromatografía ¿qué datos no pueden omitirse? 7. En la cr. de adsorción ¿qué es el factor de retención y cuál es su utilidad? 8. En la cr. de reparto ¿qué es el coeficiente de reparto y cuál es su utilidad? Al realizar una cromatografía ¿qué datos no pueden omitirse? Utilidades o aplicaciones de cada tipo de cromatografía, de adsorción y de reparto. Diferencias entre cromatografía de reparto de fase normal y de fase reversa. Ordena los siguientes eluyentes en forma creciente de polaridad: Benceno – éter de petróleo - etanol – éter etílico – acetona.