Estudio de una proteína mediante Bradford Grace Febo Zuleima Rodríguez Tatiana Rivera

Contenido Introducción Procedimiento Datos y resultados Discusión

Introducción Objetivos Importancia Teoría Descripción del Experimento

Procedimiento Se preparó 1/10mL de Phosphate Buffered Saline (PBS). Se prepararon diferentes soluciones mediante la siguiente tabla. Se removió el 1x dye reagent del refrigerador. Se esperó a que se descongelara a temperatura ambiente. Se invirtió el 1x dye reagent dos veces antes de utilizarse.

Procedimiento Se diluyó los estándares de proteína con PBS. Se pipeteó 100mL de cada solución estándar en cubetas limpias separadas. Se le añadió 5.0mL de 1x dye reagent a cada cubeta y se invirtió. Se preparó el blanco en una cubeta nueva con 100mL de dye reagent. Se incubó a temperatura ambiente por 5 minutos.

Procedimiento Se ajustó el espectrofotómetro a 595nm. Se ajustó el espectrofotómetro a cero utilizando el blanco. Se midieron las absorbancia de todos los estándares.

Datos # de Tubo Tabla #1: Diluciones de Bovine Serum Albumin con Phosphate Buffered Saline

Resultados Estándares µg/mlAbsorbancia (nm)Largo de onda (nm) Blanco Cubeta #1: Cubeta #2: Cubeta #3: Cubeta #4: Tabla #2: Absorbancias obtenidas a un largo de onda de 595nm

Resultados Gráfica: Concentración vs. Absorbancia de Bradford Protein Assay

Cálculos

Discusión Es común que la técnica de prueba de proteínas Bradford se utilice mayormente para medir o conseguir concentraciones de proteínas desconocidas en alguna mezcla. En este experimento se utilizó esta técnica para comprobar la relación entre concentración y absorbancia utilizando diluciones con concentraciones conocidas de la proteína “Bovine Serum Albumin” (BSA). El tinte Bradford (comassie blue G-250) se unió a las proteínas y formó un complejo proteico con un pH aniónico, por lo tanto el tinte reflejó el color azul y pudo ser detectado a un largo de onda de 595nm resultando en condiciones normales para este método. Los resultados fueron satisfactorios, a través de la gráfica lineal se pudo comprobar la relación entre concentración de proteína y absorbancia.

Discusión

Error Absoluto 0.760—0.900= —0.550= —0.300= —0.100= Error Relativo Porciento de error 15.56%27.27%10.0%61.0%

Discusión Por lo tanto, podemos asumir que los resultados aunque fueron lineales y afirmaron que si existe una relación entre concentración de proteínas y absorbancia, en este experimento no fueron 100% precisos, esto pudo ser debido a mal manejo de instrumentos, ya sea medición inexacta utilizando la micropipeta, presencia de residuos de jabón o detergente en microtubos u otros materiales utilizados para este experimento que desnaturalizarían la proteína haciendo que no se adhiera al tinte adecuadamente.

Referencias Arce, A, Rosas, A, & Rodríguez, L. (2007). Practicas de Inmunología. México. Giraldo, G, Loango, N, & Mejías, C. (2010). Bioquímica. Armenia.