LABORATORIO DE BIOLOGIA MOLECULAR INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL ALEXDANDER VON HUMBOLT Evaluación del PCR en la detección rápida del complejo Mycobacterium.

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1 LABORATORIO DE BIOLOGIA MOLECULAR INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL ALEXDANDER VON HUMBOLT Evaluación del PCR en la detección rápida del complejo Mycobacterium tuberculosis asociada a biopsia y aspirado ganglionar para el diagnostico de linfadenitis tuberculosa (Tesis Dr. Fernando Osores P.) POLIMORFISMO DE Mycobacterium tuberculosis

2 Polimorfismo de Mycobacterium tuberculosis Objetivo: Clasificar diferentes poblaciones por diferenciación genomica de Mycobacterium tuberculosis Descripción: Las técnicas de Biología Molecular tienen gran aceptación como herramientas de epidemiología y filogenia. Los resultados pueden servir para conocer rutas de transmisión (transmisiones nosocomiales), la diferenciación de una transmisión reciente versus una reactivación y la identificación de cepas especificas de una región. Diversas técnicas son empleadas para determinar el polimorfismo de Mycobacterium tuberculosis las mas empleadas son:  IS 6110 - RFLP  SPOLIGOPTYPING  VNTR  MIRU – PCR

3 Esta basado en el análisis de segmentos repetitivos en Tandem similares a minisatélites de eucariotes que han sido identificados dispersos en las regiones intergenicas del genoma del complejo de Mycobacterium tuberculosis. Estos segmentos repetitivos son llamados minisatelites debido a que contienen de 46-100 bp (pares de bases) y difieren entre los aislados en su número de copias. En el genoma de M. tuberculosis H37Rv se han encontrado 41 posiciones (41 locus) de los cuales 12 de los denominados MIRU son polimorficos en el número de repeticiones de una cepa a otra.

4 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 MIRU 4 2 %. Agarose gel 1.- p GEM DNA MARKER 2.- H 3.- B 4.- H37Rv 5.- 100 bp LADDER 6.- FG84 7.- CC85 8.- LC86 9.- CP89 10.- p GEM T MARKER P GEM bp 1,198 676 517 100 bp LADDER 2000 1000 500 400 300

5 MIRU 40 3%.Agarose gel 1.- p GEM DNA MARKER 2.- H 3.- B 4.- H37Rv 5.- 100 bp LADDER 6.- FG84 7.- CC85 8.- LC86 9.- CP89 10.- p GEM T MARKER 100 bp LADDER 2000 1000 500 400 300 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 P GEM bp 1,198 676 517

6 Peruvian isolate from sputum : H, B, FG84, CC85, LC86, CP89 Las muestra FG84, CC85, LC86, CP89, 25, 57, 78 y 95 fueron proporcionadas por la Dra Leslie

7 Propuesta para el 2004:  Establecer clusters de bacilos que presenten una particularidad de ubicación (geográfica)  Establecer Clusters de bacilos que presenten una particularidad clínica como forma de infección y/o grado de resistencia a drogas