Análisis por electroforesis en geles de poliacrilamida de fracciones obtenidas durante la purificación por cromatografía de intercambio iónico. Marcador.

Presentación del tema: "Análisis por electroforesis en geles de poliacrilamida de fracciones obtenidas durante la purificación por cromatografía de intercambio iónico. Marcador."— Transcripción de la presentación:

1 Análisis por electroforesis en geles de poliacrilamida de fracciones obtenidas durante la purificación por cromatografía de intercambio iónico. Marcador o Estándar de Peso Molecular (valores en kiloDaltons) 225 kDa (banda de mayor intensidad, señalada con una flecha)

2 GRUPO 3 - Gel NO Denaturante (al 12% )
Marcador Estándar Extracto crudo – 2.5 uL Extracto crudo – 3 uL Extracto crudo – 5 uL Tubo 3a (buffer sin NaCl) –fracción original. Tubo 4c (0.5mM NaCl) -–fracción original. Tubo 1d (1 mM NaCl) -–fracción original. Tubo 4b (0.25 mM NaCl)-precipit. Tubo 6c (0.5 mM NaCl) –precipit. Tubo 6c (0.5 mM NaCl) – precipit. 50 kDa

3 GRUPO 3 - Gel denaturante (al 12% )
Marcador Estándar Extracto crudo – 2.5 uL Extracto crudo – 3 uL Extracto crudo – 5 uL Tubo 3a (en buffer fosfato) Tubo 4c (0.5mM NaCl) Tubo 1d (1 mM NaCl) Tubo 4b (0.25 mM NaCl)-precipit. Tubo 6c (0.5 mM NaCl) –precipit. Tubo 6c (0.5 mM NaCl) – precipit. 50 kDa

4 GRUPO 2 - Gel denaturante (al 15% )
NOTA : UTILIZAR ESTE GEL PARA HACER EL GRAFICO Y DETERMINAR EL PESO DE LA PIRAZINAMIDASA GRUPO 2 - Gel denaturante (al 15% ) Inicio de gel Tubo 2d (1 mM NaCl) - precipitado Tubo 1d (1 mM NaCl) – fracción original Tubo 1d (1 mM NaCl)- precipit. Tubo 5b (0.25 mM NaCl) -precipitado Tubo 4c (0.5 mM NaCl) -fracción original Tubo 4c (0.5mM NaCl) - precipitado Tubo 5b (0.25 mM NaCl) – precipitado Marcador Estándar Tubo 4a (buffer sin NaCl) –fracción original Extracto crudo – 2.5 uL Pirazinamidasa 50 kDa Frente de corrida NOTA : Los datos de migración están en el último slide

5 GRUPO 2 - Gel NO Denaturante (al 12% )
Tubo 2d (1 mM NaCl) - precipitado Tubo 1d (1 mM NaCl) – fracción original Tubo 1d (1 mM NaCl)- precipit. Tubo 5b (0.25 mM NaCl) -precipitado Tubo 4c (0.5 mM NaCl) -fracción original Tubo 4c (0.5mM NaCl) - precipitado Tubo 5b (0.25 mM NaCl) – precipitado Tubo 4a (buffer sin NaCl) –fracción original Extracto crudo – 2.5 uL Marcador Estándar 50 kDa Pirazinamidasa??? Cree usted que se pueda tomar el tamaño calculado a partir de este tipo de gel como un dato preciso?

6 Datos de migración del Gel denaturante (al 15% ) del Grupo 2
Migración (cm) y Pesos Moleculares (kDa) 0, kDa 0, , , (banda de mayor intensidad, señalada con una flecha) 1, , , , frente de corrida 2, Pirazinamidasa (carril 2)