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C URVAS TEMPORALES DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA Discusión.

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Presentación del tema: "C URVAS TEMPORALES DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA Discusión."— Transcripción de la presentación:

1 C URVAS TEMPORALES DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA Discusión

2 O BJETIVOS Conocer las características generales de las enzimas como catalizadores biológicos. Adquirir la habilidad para medir la actividad de una enzima utilizando un método espectrofotométrico. Relacionar los distintos parámetros asociados a la medición de la actividad enzimática que permiten seguir y evaluar la purificación de una enzima (actividad específica, rendimiento y enriquecimiento).

3 L ACTATO DESHIDROGENASA

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5 D ATOS OBTENIDOS DE LA ACTIVIDAD DE LOS EXTRACTOS DE LAS FRACCIONES OBTENIDAS DE LA PURIFICACIÓN DE LA LDH DE MÚSCULO DE BOVINO Después se grafican los datos para obtener las pendientes de las curvas tiempoFRACCION 3FRACCION 4fpiiFpii2FPA dil 1:20 conc

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7 C ÁLCULOS mg proteína F3= mg (lo obtuve al considerar que había 7.25 / L en el concentrado (datos de determinación de proteína de mi extracto) al diluir 1:20 quedaron g/ L, como añadí 50 L entonces la celda tenía mg)

8 ACTIVIDAD DE LDH DE LAS FRACCIONES 3 Y 4 DEL PROCESO DE PURIFICACIÓN DE AL ENZIMA Fracción 3 ( mol min -1 mg -1 ) Fracción 4 ( mol min -1 mg -1 ) m r20.99 Actividad

9 ¿C ÓMO CALCULAR EL FACTOR DE PURIFICACIÓN O LAS VECES DE PURIFICACIÓN O ENRIQUECIMIENTO ? EtapaVolumen (ml) Actividad Total (U) Proteína Total (mg) Act. Espec. (U/mg) Cantidad (%) Factor de Purificación EC5003,00015,0000,2100 SA1002,4004,0000,6803,0 CII451, ,94814,5 FG501, ,0 Cuando se purifica a una proteína es habitual usar una tabla con datos que nos indiquen si el proceso que se llevo a cabo fue efectivo. Cuando una proteína no pierde actividad biológica esta se sigue a través de medir esa actividad. EC: Extracto crudo. SA: Precipitación con sulfato de amonio. CII: Cromatografía de intercambio iónico. FG: Filtración en gel.


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