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MICROARRAY DE EXPRESIÓN PARA EL ESTUDIO DE LAS ALTERACIONES DEL METABOLISMO LIPÍDICO.

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Presentación del tema: "MICROARRAY DE EXPRESIÓN PARA EL ESTUDIO DE LAS ALTERACIONES DEL METABOLISMO LIPÍDICO."— Transcripción de la presentación:

1 MICROARRAY DE EXPRESIÓN PARA EL ESTUDIO DE LAS ALTERACIONES DEL METABOLISMO LIPÍDICO

2 Se han seleccionado 319 clones del cDNA humanos (IMAGE): Controles Síntesis de colesterol Ciclo celular Beta-oxidación Metabolismo lipídico Transducción de señales Obesidad Respuesta a estrés Factores de transcripción Receptores nucleares Etc. 23 controles comerciales (genes artificiales) Lucideas Universal ScoreCard 10 controles de calibración 8 controles de relación Cy3/Cy5 3 controles de purificación 2 controles negativos Se han seleccionado 319 clones del cDNA humanos (IMAGE): Controles Síntesis de colesterol Ciclo celular Beta-oxidación Metabolismo lipídico Transducción de señales Obesidad Respuesta a estrés Factores de transcripción Receptores nucleares Etc. 23 controles comerciales (genes artificiales) Lucideas Universal ScoreCard 10 controles de calibración 8 controles de relación Cy3/Cy5 3 controles de purificación 2 controles negativos

3 Cada sonda se imprime por triplicado, en dos localizaciones diferentes. Diseño del microarray v2.2 EN TOTAL 2592 PUNTOS 6 mm 8,4 mm 10 µm Los 23 controles se imprimenpor triplicado dos localizaciones diferentes de cada subarray.

4 Media de las 6 replicas Células HepG2 tratadas con lovastatina Grafico realizado con PathwayEditor ( © Elmar Trost & Bernhard Mecnik) basandose en KEGG PATHWAY Database (http://www.genome.ad.jp/kegg/pathway.html)

5 Grafico realizado con PathwayEditor ( © Elmar Trost & Bernhard Mecnik) basandose en KEGG PATHWAY Database (http://www.genome.ad.jp/kegg/pathway.html) 60h048h SKF Celulas HL60 Células HL60 tratadas con SKF

6 Grafico realizado con PathwayEditor ( © Elmar Trost & Bernhard Mecnik) basandose en KEGG PATHWAY Database (http://www.genome.ad.jp/kegg/pathway.html) 6h2h4h048h SKF LDL Células HL60 tratadas con SKF LDL

7 Adaptado de: Regulación transcripcinal por esteroles: SREBP

8 Búsqueda de nuevos genes que responden a colesterol

9 Regulación de la expresión de la DHCR24 por colesterol

10 Localización del promotor de la DHCR24 mediante RACE-PCR

11 Actividad del promotor de la DHCR24

12 Posibles factores de transcripción en el promotor de la DHCR24 SRE

13 Sonda consenso SRE Sonda DHCR24 Extracto nuclear Sonda DHCR24 no marcada Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA) Retardo Sonda-Cy5 libre Retardo Sonda-Cy5 libre

14 Papel del colesterol en la regulación del ciclo celular DNA Células G1G1G1G1 G 2 /M S Control 0 h DNA Células G1G1G1G1 G 2 /M S DNA Células G1G1G1G1 S SKF 1, 5 µM 48 h SKF 1, 5 µM 60 h

15 La parada del ciclo en G2 es debida a la inhibición de la actividad cdc2 Martinez-Botas, J., Suarez, Y., Ferruelo, A. J., Gomez-Coronado, D., and Lasuncion, M. A. (1999). Cholesterol starvation decreases p34(cdc2) kinase activity and arrests the cell cycle at G2. Faseb J 13,

16 Grafico realizado con PathwayEditor ( © Elmar Trost & Bernhard Mecnik) basandose en KEGG PATHWAY Database (http://www.genome.ad.jp/kegg/pathway.html) Resultados: Parada

17 MODIFICACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA Y LOS FACTORES DE RIESGO CARDIOVASCULAR EN LA OBESIDAD MÓRBIDA

18

19 Tejido adiposo subcutáneo Agrupamiento jerárquico

20 Cluster 10

21 Cluster 4

22 Cluster 3

23 Cluster 8 Incluir algun gen mas y comprobarlo en el array

24 Relación de los patrones de expresión con las características fenotípicas

25 Hipertensión 8 Controles no obesos 9 Hipertensión y diabetes 6 Sin factores de riesgo cardiovascular 8 Banco de muestras de > 70 pacientes: Tejido adiposo subcutáneo Tejido adiposo visceral Músculo Sangre Plasma

26 Bioquímica-Investigación Miguel Ángel Lasunción Diego Gómez-Coronado Javier Martínez-Botas Oscar Pastor Jonatan Sánchez Nuria Olea Miguel Martín Sección Endocrinología y Nutrición: Clotilde Vázquez Nuria Palacios Servicio de Cirugía General y Digestivo: Virgilio Fresneda Moreno Roberto Peromingo


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