Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo.

Presentación del tema: "Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo."— Transcripción de la presentación:

1 Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo.
Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales 27 de mayo de 2011 Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp

2 Objetivo Que el estudiante se familiarice con los procesos de desinfección y esterilización comúnmente utilizados en un Laboratorio de Fitopatología. Conocer los medios de cultivo más usados.

3 Definiciones Esterilización = proceso mediante el cual se matan o eliminan todas las formas de vida microbiana.  estéril o no estéril. Desinfección = eliminar microorganismos patógenos total o parcialmente  niveles de desinfección. Asepsia = exclusión continuada de microorganismos contaminantes.

4 Métodos de esterilización
FISICOS: Calor seco (llama, horno) húmedo (autoclave) Radiaciones MECÁNICOS Filtración QUIMICOS Gaseosos No gaseosos

5 Calor seco Esterilización directa en la llama

6 Calor seco alcohol 96% mechero

7 Calor seco alcohol 96% + mechero

8 Calor seco Horno

9 Calor seco - Horno Se utiliza para: Temperaturas: vidrio seco
T ºC horas Se utiliza para: vidrio seco instrumentos quirúrgicos objetos metálicos aceites, vaselinas y polvos Temperaturas: 180 ºC min. 170 ºC min

10 Calor seco Recipientes de metal o envolver en papel (usar temp. menor en este caso) Dejar que vuelva a temp. ambiente antes de abrir

11 Calor húmedo Con presión: autoclave, olla presión
Para sustancias estables al calor ¿combinaciones reactivos a temp altas? Temperatura – presión – tiempo Temp. 100 110 115 121 125 130 Tiempo 20 h 2,5 h 51 min. 15 min. 6,4 min. 2,4 min.

12 Autoclave

13 Temperatura interna (ºC) según % aire eliminado
Autoclave Presión (lb/in.) Temperatura interna (ºC) según % aire eliminado 100% 66% 50% 33% 0% 5 109 100 94 90 72 10 115 105 15 121 112 25 130 126 124 30 135 128

14 Calor húmedo - Autoclave
¿cómo optimizar eficacia? eliminar aire, contenidos similares, no apretados, dejar espacios verticales, Precauciones: tapas sueltas, recipientes con hasta 1/3 de volumen, vuelta a presión normal lenta.

15 Controles de esterilización
Físicos Químicos Biológicos

16 Controles de esterilización
Físicos Químicos Biológicos

17 Esterilización química
Ventajas: no requiere altas temperaturas ni aparatos costosos Desventajas: mayor tiempo, sustancias inflamables y muy tóxicos y alto costo Ejemplos: óxido de etileno, formaldehído

18 Esterilización por filtrado
Elimina microorganismos >virus Ventaja: no modifica composición Para: cantidades pequeñas Para: vitaminas, hormonas, antibióticos, etc. Requiere bomba de vacío Ejemplo membranas de ésteres de celulosa: 1 uso, “poros” de 0,22 µm

19 CAMPANAS DE FLUJO LAMINAR

20 Radiaciones UV

21 Desinfección superficial

22 Desinfección superficial
Técnicas comunes en Fitopatología: Lavado previo en agua corriente detergente? cepillo? Agua corriente 2 o más horas Alcohol 70% Hipoclorito de sodio: 1% Cloro activo, 2 %, 0,35% etc. minutos enjuague posterior

23 Desinfección superficial
Selección de técnica(s) según: tejido: grosor, consistencia hongo a aislar: ej. Oomycetes, Rhizoctonia dónde pensamos que está el patógeno

24 Medios de cultivo Componentes básicos ¿Sólido o líquido? Ajuste de pH
Inhibidores de “contaminantes”: bacterias hongos no deseados

25 Clasificación de medios de cultivo
Sintéticos – más complicados para elaborar, muchos componentes Naturales – raíces y frutos aportan lo necesario para hongos, ¿bacterias necesitan más? Semi-sintéticos

26 ¿Qué aportan los medios?
Soporte - Agentes solidificantes: gelatina: fusión a 37ºC, solidifica 25-30ºC, se descompone a 121ºC agar: fusión a ºC, solidifica a 35-50ºC Carbono orgánico Azúcares inducen crecimiento micelio, pueden inhibir esporulación temporal- o permanentemente. Vitaminas y otros factores de crecimiento Inhibidores Sustancias que permiten diferenciar spp. o biotipos Indicadores

27 Medios comunes: Agar papa dextrosa Agar agua Agar malta
Agar harina de maíz Agar V8 Nutriente agar dextrosa Extracto de levadura dextrosa con carbonato de calcio (Yeast Dextrose CaC03) B de King

28 Dispensado de medios Temperatura: 45-50ºC
mayor: condensa H2O menor: solidificación prematura Placas de Petri: aprox. 20 ml c/u Tubos de ensayo: vertical o pico de flauta