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ROL DEL TÉCNICO EN EL LABORATORIO DE INVESTIGACIÓN Instituto de Investigaciones Médicas Alfredo Lanari Laboratorio de Neurofisiología.

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Presentación del tema: "ROL DEL TÉCNICO EN EL LABORATORIO DE INVESTIGACIÓN Instituto de Investigaciones Médicas Alfredo Lanari Laboratorio de Neurofisiología."— Transcripción de la presentación:

1 ROL DEL TÉCNICO EN EL LABORATORIO DE INVESTIGACIÓN Instituto de Investigaciones Médicas Alfredo Lanari Laboratorio de Neurofisiología

2 INVESTIGACIÓN BÁSICA INVESTIGACIÓN CLÍNICA - Efecto de las purinas (adenosina y ATP) sobre la liberación espontánea de Acetilcolina (ACh) en sinapsis neuromuscular de mamífero. - Estudio y diagnóstico de las enfermedades neuromusculares con componentes autoinmunes (Miasthenia Gravis, Síndrome de Eaton Lambert, Sindromes Miasténicos Congénitos). - Se han aplicado los conocimientos de la investigación sobre purinas en el diagnóstico de enfermedad bipolar. LÍNEAS DE INVESTIGACIÓN

3 Animales de Laboratorio - Dentro de la Facultad de Medicina funciona el Comité Institucional para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio (CICUAL), cuyo objetivo es establecer pautas y normas para un adecuado uso de los animales de experimentación. - Los proyectos de investigación en los cuales se utilicen animales, deben contar con la aprobación de este comité. - Considerando a los animales como seres sensibles, se debe evitar o minimizar su sufrimiento.

4 Ratones de Laboratorio Genoma, sistema inmune, metabolismo, anatomía y fisiología muy similares a los de los seres humanos Tamaño apropiado para la crianza y manipulación No requieren de demasiados cuidados Alto número de crías Breve período de gestación (19-21 días) y destete rápido

5 Ratones cepa CF1 - Adultos, ambos sexos, peso corporal: g. - Bioterio: criados y mantenidos bajo normas adecuadas. - Alimento y agua a voluntad. - Ciclos de 12 hs de luz artificial y 12 hs de oscuridad. - Temperatura ambiente entre 19-22ºC

6 OBTENCIÓN DE LAS PREPARACIONES - Para realizar la disección del músculo, se anestesia el ratón con Tiopental sódico (50 mg/kg) en forma intraperitoneal. - Los estudios electrofisiológicos se realizan en preparaciones de hemidiafragma izquierdo obtenidas de los ratones. Se elige este músculo porque posee pocas capas de células de espesor, permitiendo por trans-iluminación la visualización de los axones terminales.

7 PREPARACIÓN DE MICROPIPIPETAS - Se obtienen a partir de capilares de borosilicato de paredes finas, con filamento interno. - Sus extremos se estiran con un Puller (estirador de pipetas). - Se llenan con ClK (3 M). - El registro intracelular de la frecuencia de los potenciales de placa miniatura (fMEPPs) se realiza con técnicas convencionales con micropipetas en distintas condiciones experimentales.

8 Puller Estiramiento de capilares Llenado de micropipetas Micropipeta en holder

9 PREPARACIÓN DE SOLUCIONES - La solución base que se utiliza es Ringer Krebs (Ringer Normal). - Su composición en sales es similar a la de la sangre (ClNa, ClK, Cl 2 Mg, Cl 2 Ca, Glucosa, Hepes) - Se lleva a pH Se modifica agregando diferentes reactivos, según el protocolo experimental (agonistas, antagonistas, bloqueantes, inhibidores) - Para la ejecución de los experimentos, las soluciones se colocan en la cámara de registro en cantidad suficiente como para que la preparación se encuentre inmersa en el líquido. +-+-

10 Investigación Clínica - En el suero de los pacientes con Enfermedades Neuromusculares se encuentran anticuerpos (IgG) dirigidos contra componentes esenciales en la secreción del neurotransmisor (ACh). - Para investigarlos, se utiliza el modelo de transferencia pasiva de esos sueros a ratones, y el posterior estudio de la transmisión neuromuscular en los diafragmas de los animales receptores. - El diagnóstico de los pacientes fue realizado clínicamente por neurólogos idóneos.

11 1- Extracción de 20 ml de sangre del paciente 4- Disección del hemidiafragma izquierdo al 3° día 3- Inyección ip 1ml/día durante 2 días Transferencia pasiva de suero al ratón 5- Registro de amplitud de MEPP 2- Se separan los sueros y se conservan en el freezer a -20ºC hasta su utilización

12 MUCHAS GRACIAS


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